Aline Aki TanikawaI IV
Sarita Fiorelli Dias BarretoII IV
Rejane Maria Tommasini GrottoIII IV
Maria Inês de Moura Campos PardiniIII IV
IPrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia em Clínica Médica. Faculdade de Medicina de Botucatu. Universidade Estadual Paulista. Botucatu, SP, Brasil
IIPrograma de Pós-Graduação em Pesquisa e Desenvolvimento: Biotecnologia Médica. Faculdade de Medicina de Botucatu. Universidade Estadual Paulista. Botucatu, SP, Brasil
IIIDepartamento de Clínica Médica. Faculdade de Medicina de Botucatu . Universidade Estadual Paulista. Botucatu, SP, Brasil
IVLaboratório de Biologia Molecular. Faculdade de Medicina de Botucatu. Universidade Estadual Paulista. Botucatu, SP, Brasil
Palavras-Chave: HIV-1, genética; Transcriptase Reversa do HIV; Proteínas do Vírus da Imunodeficiência Humana; Farmacorresistência Viral Múltipla
Palabras-clave: VIH-1, genética; Transcriptasa Inversa del VIH; Proteínas del Virus de la Inmunodeficiencia Humana; Farmacorresistencia Viral Múltiple
Key words: HIV-1, genetics; HIV Reverse Transcriptase; Human Immunodeficiency Virus Proteins; Drug Resistance, Multiple, Viral
A pressão seletiva do esquema terapêutico antirretroviral (ARV) pode resultar na emergência de variantes resistentes, as quais pré-existem minoritariamente no paciente infectado com HIV. Mutações de ponto de uma ou duas bases no gene da transcriptase reversa (TR) estão associadas com resistência aos inibidores dessa enzima. Além disso, há relatos de que a resistência a múltiplos análogos nucleosídeos pode também ser resultante de diversas inserções/mutações existentes nos vírus. 1 , 5
O uso prolongado da terapia ARV com zidovudina, frequentemente junto ou seguida pela administração de outros inibidores nucleosídeos, está associado com a seleção de variantes com inserção de aminoácidos entre os resíduos 69 e 70 da TR do HIV-1. 3 , 5
Paciente do sexo masculino, 16 anos, pardo e com exposição vertical ao vírus HIV. O caso foi notificado em 1996 e, desde então, manteve carga viral detectável e níveis de CD4+ baixo, sem, no entanto, desenvolver sintomas da síndrome da imunodeficiência adquirida (Aids). A menor contagem de linfócitos CD4+ ocorreu em 2011, 234 cels/mm 3 , e a carga viral no mesmo ano foi de 4,624 log. O uso de ARV teve início em 2007 com os inibidores da TR zidovudina e didanosina, seguido da introdução de efavirenz em 2008. Após o compromisso de adesão do paciente, o teste de resistência a antirretrovirais (TRUGENE ® HIV-1 Genotyping Test on an OpenGene ® DNA Sequencing System, Siemens Healthcare Diagnostics , Deerfield, IL, USA) foi solicitado em 2011 e realizado no Laboratório de Biologia Molecular do Hemocentro da Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista (UNESP), pertencente à Rede Nacional de Genotipagem do HIV-1 (RENAGENO) do Ministério da Saúde.
O subtipo viral caracterizado foi F1, utilizando o gene da transcriptase reversa, segundo análise realizada pela ferramenta REGA HIV Subtyping Tool . a A sequência obtida evidenciou a mutação T69S, seguida das inserções Ser-Gly (SG) / Ser-Ala (SA), o que sugere a coexistência de variantes virais com inserções de aminoácidos distintos no códon 69, confirmada a partir de sequências geradas por primers forward e reverse , segundo especificações da técnica utilizada. A análise do eletroferograma ( Figura ) mostrou as sequências de nucleotídeos AGT e G S T, simultaneamente.
A sequência obtida foi analisada utilizando o algoritmo Blast Basic Local Alignment Search Tool (Blast), b disponível no National Center for Biotechnology Information (NCBI), sendo constatada uma similaridade de 93%.
A inserção de dois aminoácidos entre os resíduos 69 e 70 da TR do HIV-1 por si só não confere resistência significativa. No entanto, quando associada às substituições, como T215Y, M41L, A62V ou L210W, pode ocasionar a emergência de variantes resistentes a múltiplos análogos de nucleosídeos. 1 , 3 , 5
As mutações de inserção entre os códons 69 e 70 estão presentes, com baixa prevalência (aproximadamente 0,5% a 2,4%), 2 , 3 , 4 em indivíduos experimentados com inibidores da TR análogos nucleosídeos, sendo mais comum a inserção dos dipeptídeos serina-serina, serina-arginina e serina-glicina. Tais rearranjos estão localizados na estrutura hairpin loop β3-β4 da TR do HIV-1 e estão suscetíveis à interação com o processo de ligação de nucleotídeos. 2
Em 1999, Larder et al 1 relataram que a alteração 69Ser-(Ser-Ser), por si só, demonstrou apenas uma diminuição significante na suscetibilidade ao 3TC. No entanto, Winters et al 5 (1998) reportaram que a mutação 69Ser-(Ser-Ala) ou 69Ser-(Ser-Gly), mesmo sem demais mutações genotípicas, conferia resistência a múltiplas drogas.
A detecção da substituição única, Thr69Ser, sem inserção, sugere que a mutação possa se desenvolver antes da inserção de aminoácido. No entanto, ainda não é conhecido especificamente o mecanismo preciso para a ocorrência da inserção. 1
1. . Larder BA, Bloor S, Kemp SD, Kurt H, Desmet RL, Miller V, et al. A family of insertion mutations between codons 67 and 70 of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase confer multinucleoside analog resistance. Antimicrob Agents Chemother. 1999;43(8):1961-7. [ Links ]
2. . Masquelier B, Race E, Tamalet C, Descamps D, Izopet J, Buffet-Janvresse C, et al. Genotypic and phenotypic resistance patterns of human immunodeficiency virus type 1 variants with insertions or deletions in the reverse transcriptase (RT): multicenter study of patients treated with RT inhibitors. Antimicrob Agents Chemother.2001;45(6):1836-42. DOI:10.1128/AAC.45.6.1836-1842.2001 [ Links ]
3. . Tamalet C, Yahi N, Tourrès C, Colson P, Quinson AM, Poizot-Martin I, et al. Multidrug resistance genotypes (insertions in the â3-â4 finger subdomain and MDR Mutations) of HIV-1 reverse transcriptase from extensively treated patients: incidence and association with other resistance mutations. Virology . 2000;270(2):310-6. DOI:10.1006/viro.2000.0261 [ Links ]
4. . Van Vaerenbergh K, Van Laethem K, Albert J, Boucher CA, Clotet B, Floridia M, et al. Prevalence and characteristics of multinucleoside-resistant human immunodeficiency virus type 1 among European patients receiving combinations of nucleoside analogues. Antimicrob Agents Chemother . 2000;44(8):2109-17. DOI:10.1128/AAC.44.8.2109-2117.2000 [ Links ]
5. . Winters MA, Coolley KL, Girard YA, Levee DJ, Hamdan H, Shafer RW, et al. A 6-basepair insert in the reverse transcriptase gene of human immunodeficiency virus type 1 confers resistance to multiple nucleoside inhibitors. J Clin Invest.1998;102(10):1769-75.DOI:10.1172/JCI4948 [ Links ]
aREGA HIV Subtyping Tool [citado 2012 nov 19]. Disponível em: http://www.bioafrica.net/rega-genotype/html/subtypinghiv.html
bNational Center for Biotechnology Information (NCBI). Basic Local Alignment Search Tool (BLAST); 2012 [citado 2012 nov 20]. Disponível em: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi