Bolsa 16/14513-8 - Autofagia, Degeneração neural - BV FAPESP
Análise do fluxo autofágico durante a agregação proteica contendo alfa-sinucleína e tau hiperfosforilada em cultura de células do hipocampo, substância negra e locus coeruleus
Processo: 16/14513-8
Beneficiário: Rafaela Regina Cardoso
Assunto(s): Autofagia Degeneração neural Hipocampo alfa-Sinucleína Locus cerúleo Substância negra Corantes fluorescentes
Alterações na estrutura e composição bioquímica das células, formação de placas senis e neurofibrilares são características comuns do encéfalo em processo degenerativo. Esses emaranhados neurofibrilares são constituídos essencialmente por proteína tau hiperfosforilada. A presença desses agregados proteicos leva a prejuízos intracelulares que culminam em morte celular. A falha nas vias de degradação celular pode favorecer a agregação de proteínas intra e extracelulares e culminar com a neurodegeneração. Desta forma, pretende-se analisar a formação e degradação dos autofagolisossomos e a co-localização dos autofagossomos com a tau hiperfosforilada e a alfa-sinucleína, a fim de estudar a relação do fluxo autofágico com a formação dos agregados proteicos. Para essa análise, serão empregadas sondas fluorescentes as quais marcam organelas ácidas com cores distintas dependendo da faixa do pH, bem como anticorpos específicos para a marcação da proteína tau hiperfosforilada e da alfa-sinucleína. O estudo será realizado em culturas primárias de células do hipocampo, substância negra e locus coeruleus submetidas a exposição a rotenona em concentrações de 0,3 a 1nM, sendo que esta última concentração já determina a presença de agregados proteicos contendo tau hiperfosforilada e alfa-sinucleína nas células de estudo.