BDPI USP - Detalhe do registro: Caracterização Molecular de um Peptídeo Antimicrobiano em Rhynchosciara americana
Caracterização Molecular de um Peptídeo Antimicrobiano em Rhynchosciara americana (2011)
Marcolino, Humberto V. C.
Rezende-Teixeira, Paula
USP affiliated authors: SANTELLI, GLAUCIA MARIA MACHADO - ICB
Abstract: O crescente desenvolvimento de resistência à antibióticos por bactérias leva a necessidade de pesquisar sobre novos peptídeos antimicrobianos (AMP´s) produzidos por outros organismos. Peptídeos antimicrobianos são sintetizados por vários animais, fazendo parte do sistema imunológico inato, e são produzidos naturalmente ou logo após uma infecção. Neste trabalho, a diptericina, peptídeo antimicrobiano presente em dípteros como Drosophila [1], foi identificada em uma biblioteca de cDNA do díptero Rhynchosciara americana e caracterizado. A caracterização do peptídeo antimicrobiano Diptericina (RaDiptB), teve início com a identificação de um EST na biblioteca de mRNA da glândula salivar de Rhynchosciara americana, construída no início do terceiro estágio larval. Com o programa BLAST foi possível identificar a natureza do peptídeo, além de possibilitar a comparação com peptídeos homólogos. Para identificar quais tecidos expressam RaDitpB, foi feito PCR, utilizando primers específicos e cDNA de glândula salivar, ovário, testículo, larva jovem inteira, corpo gorduroso e ovo do díptero. Para o perfil de expressão, foram feitos PCRs em tempo real com RNAs extraídos do 4o estágio larval em, diferentes períodos, do corpo gorduroso, glândula salivar e ovário de Rhynchosciara americana.Verificou-se que o mRNA que codifica RaDiptB possui 629pb, com uma região codificante composta por 402pb, que traduz, assim, um peptídeo de 134 aminoácidos. Nesse peptídeo foi identificado um domínio protéico homólogo ao de Attacin C (e-value:1.20e-13), semelhante a outros peptídeos antimicrobianos presentes em dípteros, como à diptericina B de Drosophila melanogaster (e-value: 2e-09). No PCR, foi verificado que os órgãos ou fases do desenvolvimento que expressam RaDiptB são: glândula salivar, ovário, corpo gorduroso e ovo (Fig.1). Com o PCR em tempo real, verificou-se que houve expressão de RaDiptB durante todo 4o estágio larval, sendo no corpo gorduroso as maiores expressões no início de rede e na fase de pupa. Na glândula salivar, a expressão foi maior durante o início de rede, enquanto que no ovário, a expressão foi maior na fase adulta. Fig. 1: Presença do peptídeo RaDiptB em órgãos e fase de vida de Rhynchosciara americana. Da esquerda para a direita: glândula salivar; ovário; testículo; larva jovem; corpo gorduroso; e ovo. A presença de um domínio Attacin-c, que está presente em peptídeos antimicrobianos de insetos [1] e a semelhança do mesmo com a diptericina-b de Drosophila melanogaster, são evidências de que o peptídeo em questão possui provável ação anti-bacteriana. O fato da expressão do peptídeo ser maior no início de rede na glândula salivar, sugere que RaDiptB possa ser secretado no casulo e realizar alguma proteção contra microorganismos no momento em que o inseto se prepara para pupar.
MARCOLINO, Humberto V. C.; REZENDE-TEIXEIRA, Paula; MACHADO-SANTELLI, Gláucia Maria. Caracterização Molecular de um Peptídeo Antimicrobiano em Rhynchosciara americana. Anais.. São Paulo: Universidade de São Paulo, 2011.
Marcolino, H. V. C., Rezende-Teixeira, P., & Machado-Santelli, G. M. (2011). Caracterização Molecular de um Peptídeo Antimicrobiano em Rhynchosciara americana. In . São Paulo: Universidade de São Paulo.
Marcolino HVC, Rezende-Teixeira P, Machado-Santelli GM. Caracterização Molecular de um Peptídeo Antimicrobiano em Rhynchosciara americana. 2011 ;