Bolsa 15/17412-5 - Cadelas, Biotecnologia da reprodução - BV FAPESP
Imageamento químico e imunodetecção de receptores de prolactina e estrógeno nas tu...
Influência do EGF na viabilidade e ativação de folículos primordiais no tecido ovariano de cadelas pré púberes e adultas
Processo: 15/17412-5
Supervisor no Exterior: Nucharin Songsasen
Vinculado à bolsa: 13/21667-3 - Identificação de marcadores de competência envolvidos no ciclo celular de oócitos caninos pela análise protêomica, BP.DR
Assunto(s): Cadelas Biotecnologia da reprodução Técnicas in vitro
Este estudo irá avaliar a influência do fator de crescimento epidermal (EGF)na viabilidade in vitro e ativação de folículos primordiais de tecido ovariano de cadelas pré-púberes (idade, <6 meses)e adultas (idade, >8 meses). A dose de EGF irá ser selecionada baseada em estudos utilizando tecido ovariano de outras espécies e dois experimentos serão conduzidos. O experimento 1 irá avaliar as vias de sinalização que influenciam a viabilidade folicular. Para isso, peças de tecido cortical de cinco cadelas pré-púberes e quatro cadelas adultas irão ser distribuídos aleatoriamente em oito grupos tratamento: 1] sem fator (grupo controle), 2]100 ng/ml de EGF, 3] 100 ng/ml de EGF suplementado com 0.1 µM de AG1478 (inibidor de EGFR ), 4] 100 ng/ml de EGF suplementado com 1 µM de AG1478, 5] 100 ng/ml de EGF suplementado com 1µM de U0126 (inibidor de MAPK), 6] 100 ng/ml de EGF suplementado com 10 µM U0126, 7] 100 ng/ml de EGF suplementado com 1µM de LY294002 (inibidor de PI3K), ou 8] 100 ng/ml de EGF suplementado com 10 µM de LY294002. Tecido ovariano fresco e tecido ovariano cultivado por 14 dias irão ser avaliados para viabilidade e morfologia. Após a extração de proteínas do tecido fresco e cultivado, será avaliada a fosforilação do MAPK e AKT pela análise de Western blot. O experimento 2 irá avaliar a influência da via de sinalização do EGF na proliferação celular ovariana. A proliferação celular no tecido fresco e cultivado será avaliado por PCNA e coloração EdU.