Título do Projeto: identificação e caracterização de amiloides funcionais no protista trichomonas vaginalis: implicações na biologia do parasito e na interação com hospedeiro
Resumo: Amiloides são agregados proteicos que se caracterizam por apresentarem estrutura organizada em fibrilas ricas em fitas-beta e por serem associados a doenças como, Alzheimer e Parkinson. Contudo, em alguns casos, os amiloides podem exercer funções biológicas vitais para as células, sendo denominados amiloides funcionais. Estudos sobre amiloides funcionais em microorganismos patogênicos são de particular importância devido ao papel desses agregados proteicos como fatores de citoaderência para o estabelecimento dos patógenos nos hospedeiros. Dentro desse contexto, um dos pontos do presente projeto será identificar amiloides funcionais no parasito Trichomonas vaginalis, agente etiológico da tricomoníase humana, doença sexualmente transmissível não-viral mais comum do planeta que pode provocar sérias complicações gestacionais, maior predisposição ao HIV, câncer de próstata e de colo de útero. T. vaginalis é um parasita extracelular e, portanto, a citoaderência é um pré-requisito para o estabelecimento e manutenção do parasito no trato urogenital humano. Ao entrarem em contato com as células hospedeiras, T. vaginalis pode formar agregados entre si, sendo estes correlacionados com a virulência por apresentarem uma maior superfície de adesão e um aumento de expressão de adesinas, cisteíno-proteases e outros fatores associados à citoaderência. Entretanto, pouco se sabe a respeito dos mecanismos de ação dos fatores descritos acima nos processos de citoaderência e formação de agregados celulares de T. vaginalis. Além disso, não há estudos referentes a amiloides funcionais em T. vaginalis. Desse modo, o presente projeto tem como objetivo lançar mão de métodos de bioinformática e de diferentes abordagens experimentais a níveis celular, bioquímico e molecular, visando identificar a presença de amiloides funcionais em T. vaginalis com ênfase em compreender suas possíveis participações nos mecanismos de citoaderência e formação de agregados celulares pelo parasito. Para identificar proteínas com potencial amiloidogênico em T. vaginalis, sequências proteicas primárias do genoma do parasito serão analisadas em algoritmos específicos para calcular a propensão das proteínas em sofrer agregação amiloide. Para verificar a participação de amiloides durante a interação de tricomonas com o hospedeiro, bem como durante formação de agregados celulares de T. vaginalis, propomos realizar experimentos de coincubação de T. vaginalis com células e proteínas hospedeiras, utilizando diversos marcadores específicos para amiloides, como vermelho do Congo, tioflavina-T e componente amiloide P sérico. Além disso, pretendemos expressar e obter proteínas recombinantes purificadas envolvidas na citoaderência de T. vaginalis, tais como adesinas e cisteíno-proteinases, para analisar seus potenciais amiloidogênicos in vitro. Sendo assim, o presente projeto visa contribuir de maneira significativa para desvendar as estratégias envolvidas na citoaderência de T. vaginalis, gerando informações pertinentes que poderão auxiliar para descoberta de alvos terapêuticos promissores e para o desenvolvimento de tratamentos alternativos para a doença.
Antonio Teixeira de Matos COORDENADOR(A)
Título do Projeto: investigação do decaimento de micro-organismos indicadores e de alguns patógenos em solo receptor de lodo de esgoto sanitário
Resumo: No projeto de pesquisa proposto propõe-se estudar processos e tecnologias relativamente novos e muito promissores para a detecção e quantificação de agentes patogênicos, presentes no lodo de esgoto cru e tratado, para serem enquadrados, de acordo com a legislação brasileira, em classes A ou B. Além disso, a compreensão e modelagem matemática da dinâmica da população microbiana indicadora e patogênica no solo da área receptora do lodo de esgoto possibilitará inferências sobre o risco sanitário da utilização agrícola desse resíduo. Outro fator relevante para a pesquisa é o de prover mais subsídios à existência ou não de correlação entre a presença de micro-organismos indicadores utilizados atualmente e a de agentes patogênicos, presente no lodo de esgoto doméstico, o que passou a ser possível com o desenvolvimento das técnicas de biologia molecular.
Título do Projeto: diferencial proteômico e herança da tolerância ao deficit hídrico em milho-pipoca
Resumo: No cenário mundial atual, questões relacionadas às mudanças climáticas e à produção de alimentos, são assuntos de extrema importância, considerando a estratégia de sustentabilidade agrícola. Nas últimas décadas, vêm-se registrando maiores freqüências de má distribuição de chuvas e condições de deficit hídrico, ocasionando perdas na produção agrícola. A região Norte Fluminense - locus onde se pretende desenvolver a proposta - é, caracteristicamente, de baixa pluvisiosidade e de distribuição irregular de chuvas, elevando o custo com irrigações para o bom êxito da produção agrícola. Tal situação adversa é, também, comum a extensas regiões do Brasil, que poderiam ter proveitosa utilização agrícola. Isto posto, não apenas em nível regional, o desenvolvimento de genótipos adaptados à condição de deficit hídrico é, cada vez mais iminente; não por acaso, novas concepções de pesquisas científicas nessa área tornam-se necessárias para enfrentar as adversidades ambientais. A cultura do milho-pipoca, embora bastante apreciada no País e deter alta rentabilidade econômica, ainda carece de detalhado estudo agronômico, fisiológico e molecular, associado à deficiência hídrica, que permita a sua eficiente utilização em programas de melhoramento, visando à otimização do cultivo deste tipo de milho em condições de deficiência de água. Nesse contexto, e considerando que a UENF possui uma Coleção Ativa de Germoplasma de milho-pipoca, incluindo linhagens obtidas de acessos oriundos de países de clima temperado e tropical, além do que instituições públicas e privadas ainda trabalham timidamente no desenvolvimento de pesquisas científicas que revelem genótipos adaptados à condição de deficit hídrico, pesquisadores da UENF, em parceria com pesquisador da Embrapa – Sete Lagoas e da Universidade de Talca, no Chile, pretendem impulsionar uma linha de pesquisa relacionada com a sustentabilidade agrícola do milho-pipoca na região Norte Fluminense, com os seguintes intentos principais: i) avaliar a Coleção de Linhagens de Milho-Pipoca pertencente ao Banco de Germoplasma da UENF, quanto a atributos agronômicos, fisiológicos, de marcadores de DNA e proteômicos, em resposta ao estresse hídrico; e ii) estudar a base genética da tolerância ao deficit hídrico, utilizando linhagens selecionadas da Coleção de Germoplasma de Milho-Pipoca da UENF. Antevêem-se resultados alvissareiros que irão contribuir com a evolução da agricultura nacional, bem como em área fronteiriça da ciência, quer na formação de recursos humanos, quer na geração de resultados científicos.
Antonio Vicente Mundim COORDENADOR(A)
Título do Projeto: entendendo a piometra: efeito da hiperplasia endometrial cística na expressão gênica de receptores tipo toll e mediadores inflamatórios no endométrio de cadelas.
Resumo: A hiperplasia endometrial cística (HEC) evoluindo para a piometra é a uteropatia mais comum em cadelas. Pode estar presente em cadelas saudáveis e com piometra e sabe-se que a progesterona luteal ou exógena pode causar a HEC e causar imunossupressão, predispondo a infecções oportunistas e desenvolvimento de infecções uterinas. O presente trabalho suporta a hipótese de que a hiperplasia endometrial cística prejudica e reduz ainda mais a resposta imune inata e inflamação uterina na fase do diestro. Diante disto, objetiva-se avaliar o efeito da hiperplasia endometrial cística na expressão gênica de receptores tipo toll e mediadores inflamatórios no endométrio de cadelas na exposição a lipopolissacarídeos. Serão utilizadas 24 fêmeas clinicamente saudáveis, adultas e de raças variadas submetidas à ovariohisterectomia eletiva. Colher-se-á dois explantes do endométrio de cada útero e inseridos em placas de cultivo celular com e sem tratamento com LPS Decorrido 24 horas, as placas serão retiradas da estufa de CO2 a 37°C e colhido os sobrenadantes para avaliação da concentração das interleucina 6 (IL-6) e IL-12 e o explante para a avaliação da expressão gênica de COX1, COX2, PGES1, PGFS, TLR2, TLR4, IL6, IL12 e IL1B.