3. Imunohistoquímica para antígenos gliais - GFAP, VIM.
Destaques da imunohistoquímica (parte do ganglioglioma).
GFAP - astrócitos, alguns de padrão gemistocítico Astrócitos aberrantes Astrócitos imitando neurônios.
GFAP - Corpos hialinos granulosos. VIM. Astrócitos aberrantes multinucleados, corpos hialinos granulosos. MAP2. Positividade citoplasmática nos neurônios do tumor.
NF. Axônios no tumor. Também, neurônios, corpos hialinos granulosos. Cromogranina. Neurônios no tumor, inclusive muitos multinucleados. SNF. Positividade no neurópilo tumoral e em torno de neurônios (sinapses axossomáticas). Neurônios geralmente negativos
Tubulina. Positividade citoplasmática nos neurônios do tumor NeuN . Positividade nuclear e citoplasmática em alguns neurônios do tumor CD34. Vasos do tumor.
CD34. Positividade em membrana e no citoplasma em algumas células neoplásicas Ki-67. Positividade em cerca de 1 a 3 % dos núcleos das células neoplásicas. p53. Positividade em cerca de 5 % dos núcleos das células neoplásicas, inclusive vários neurônios.
Destaques do HE, colorações especiais e microscopia eletrônica. Parte de neurocitoma central.
Exame em pequeno aumento do corte após reação para GFAP mostra numerosos prolongamentos astrocitários permeando todas as áreas do preparado. Os astrócitos, identificáveis pela positividade para GFAP, mostram grande variabilidade de aspectos e muitas anomalias morfológicas. Para astrócitos em microscopia eletrônica deste caso, clique.
GFAP. Prolongamentos astrocitários. Estruturas alongadas, GFAP positivas, de diferentes espessuras, que cruzam o tumor em todas direções, provavelmente correspondem a prolongamentos de astrócitos participantes da neoplasia, muitos dos quais estruturalmente aberrantes (ver exemplos).
GFAP. Astrócitos de padrão gemistocítico. Uma minoria dos astrócitos neoplásicos tinha padrão morfológico gemistocítico (citoplasma abundante, núcleo excêntrico). Lembram células reacionais não tumorais (mas, no caso, não são).
GFAP. Astrócitos aberrantes. A maioria, porém, eram elementos claramente anômalos quanto a tamanho, forma, espessura e distribuição dos prolongamentos, com núcleos atípicos, inclusive nucléolos proeminentes, lembrando núcleos de neurônios. São, portanto, células claramente tumorais. Algumas destas poderiam passar como neurônios em HE e só a clara positividade para GFAP as define como de linhagem astrocitária. Neurônios verdadeiros são GFAP negativos.
GFAP. Astrócitos imitando neurônios. A célula abaixo é particularmente ilustrativa desta dualidade. Tem núcleo volumoso com nucléolo proeminente destacando-se na cromatina clara, como os de neurônios. Contudo, lança prolongamento a um vaso próximo, como é habitual dos astrócitos, inclusive com a dilatação terminal erroneamente denominada 'pé sugador'. A positividade incontestável para GFAP define a célula como de linhagem astrocitária.
GFAP. Corpos hialinos granulosos.
Corpúsculos arredondados, vários de textura heterogênea, já discutidos em HE e tricrômico de Masson. A positividade para GFAP dos exemplos nas fotos ao lado e abaixo demonstra que pertencem a astrócitos, representando acúmulo de material em prolongamentos celulares. Para corpos granulosos positivos para neurofilamento (NF) e, portanto, situados em axônios, clique. Para exemplos em microscopia eletrônica, clique.
GFAP. Neurônios (GFAP-negativos). Os neurônios participantes do ganglioglioma também apresentavam aberrações morfológicas, a exemplo dos astrócitos. Diferenciavam-se destes pela negatividade completa para GFAP, como esperado. Abaixo, exemplos de células positivas (astrócitos) e negativas (neurônios) lado a lado. Alguns neurônios são envolvidos por prolongamentos astrocitários ou os pericários das duas células mantêm extenso contato (o que nunca ocorre em tecido nervoso normal). Exemplos destas 'relações íntimas' já foram observados em outros casos de ganglioglioma e displasias corticais.
Os resultados com VIM praticamente se superpõem aos com GFAP, já que astrócitos habitualmente expressam os dois filamentos intermediários do citoesqueleto. Em aumento fraco, tem-se idéia da participação dos astrócitos no ganglioglioma. Vimentina também marca vasos e células endoteliais.
VIM. Astrócitos aberrantes. Astrócitos anômalos, alguns chegando a bizarros, são realçados por vimentina. São comuns o citoplasma volumoso, por vezes heterogêneo e com vacúolos, desproporção entre núcleo e citoplasma e multinucleação. Em áreas, observam-se numerosos prolongamentos astrocitários.
VIM. Astrócitos lembrando neurônios. Outro aspecto curioso, que confirma achados acima com GFAP, foram células com núcleo virtualmente idêntico ao de neurônios, arredondados, grandes, com nucléolo proeminente e cromatina frouxa, e citoplasma positivo para vimentina, afastando linhagem neuronal e indicando natureza astrocitária.
VIM. Corpos hialinos granulosos. Apresentavam aspectos semelhantes aos com GFAP acima. Provavelmente, trata-se das mesmas estruturas, derivadas de astrócitos a julgar pela positividade para VIM e GFAP.
VIM. Neurônios. Células classificadas como neurônios apresentavam o núcleo característico e citoplasma abundante de limites nítidos, negativo para vimentina. Também mostravam anormalidades citológicas, incluindo pseudoinclusões intranucleares. Para mais detalhes, ver HE, LFB-Nissl, e imunohistoquímica para neurônios (1) (2).
VIM. Neurônios com pseudoinclusões. A pseudoinclusão é uma lingüeta de citoplasma que se insinua em uma dobra da membrana nuclear. A impressão de que se encontra no interior do núcleo deve-se ao plano de corte. Pseudoinclusões são raríssimas em neurônios normais. As aqui observadas são testemunho das aberrações das células tumorais. Para exemplo em HE, clique.
VIM. Astrócito gemistocítico reacional. Esta célula foi observada na periferia da massa neoplásica. Provavelmente trata-se de astrócito reacional, não pertencente ao ganglioglioma. Apesar do seu grande volume, ainda guarda as características e proporções núcleo-citoplasma das células não neoplásicas.
Agradecimentos. Preparações imunohistoquímicas pelas técnicas Ana Claudia Sparapani Piaza, Arethusa de Souza e Luzia Aparecida Magalhães Ribeiro Reis. Laboratório de Pesquisa, Depto de Anatomia Patológica da FCM-UNICAMP. Campinas, SP.