ReP USP - Detalhe do registro: Reconstituição do monômero d da hemoglobina extracelular gigante de Glossoscolex paulistus acompanhada por técnicas espectroscópicas
Autor USP: RIBELATTO, JULIO CARLOS - IQSC
Abstract: A hemoglobina (Hb) do anelídeo Glossoscolex paulistus é uma Hb extracelular gigante. Esta é constituída por quatro cadeias polipeptídicas a, b, c e d contendo o heme. As cadeias a, b e c formam um trímero mantido por ligações dissulfeto e a cadeia d é um monômero. Neste trabalho é apresentado o estudo da reconstituição do monômero d da metaHb de G. paulistus partindo de uma solução de hemina. O processo de reconstituição é feito pela titulação em uma solução de hemina em pH 7,0, com a cadeia d na forma apo. A hemina é uma metaloporfirina com as mesmas características do grupo heme. A reconstituição é monitorada por espectroscopia de absorção ótica observando-se o surgimento da banda de Soret (centradas em 415 nm) e das bandas a e b (entre 500 e 600 nm). Este conjunto de bandas é uma características da ligação do grupo heme na hemoglobina. Usando um método matemático, o qual analisa os espectros ópticos experimentais, como uma combinação linear destes conjuntos de espectros (CCA - Convex Constrain Algorithm), são observados três espécies químicas em solução ao longo da titulação. Acredita-se que a segunda espécie é constituída de agregados de hemina que não se ligaram no bolsão hidrofóbico. Pela técnica de espalhamento de luz não permitiu observa nenhum tipo de agregados, provavelmente devido às baixas concentrações de apomonômero utilizadas nos experimentos. Estudos comparativos da emissão de fluorescência do monômero d nativo da metaHb de G. paulistus e do monômero dreconstituído foram desenvolvidos variando-se o pH. Todas as mudanças espectrais ocorridas no monômero d nativo, tanto na faixa básica como na faixa ácida, são observadas também para o monômero d reconstituído. Isto prova que a ligação de uma hemina exógena ocorre de forma específica na cadeia protéica do monômero d da hemoglobina extracelular gigante de G. paulistus
Estudos espectroscópicos das interações desurfactantescom a cadeia monomérica D da hemoglobina de glossoscolex paulistus