Bolsa 16/16753-6 - Fisioterapia, Músculo esquelético - BV FAPESP
Análise da regeneração nervosa e da recuperação funcional em ratos com lesão por a...
Efeitos da fotobiomodulação sobre a expressão gênica de calcineurina e miostatina no músculo esquelético pós lesão nervosa periférica de ratos Wistar
Processo: 16/16753-6
Beneficiário: Patrick Raoul Vicente de Matos
Assunto(s): Fisioterapia Músculo esquelético Regeneração nervosa Nervo isquiático Expressão gênica Terapia a laser de baixa intensidade Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR) Ratos Wistar
Clinicamente, uma lesão nervosa periférica (LNP) não apresenta risco de vida ao indivíduo, porém pode gerar um impacto negativo na qualidade de vida nos casos onde não há uma completa regeneração que resulta em distúrbios motores ou sensoriais. A literatura evidencia a busca constante por terapêuticas eficazes na modulação positiva do reparo neuromuscular pós LNP. Neste contexto, a fotobiomodulação tem demonstrado efeitos positivos no tratamento de LNP, contudo os estudos se restringem a utilização especialmente do laser em baixa intensidade (LBI) sendo este aplicado somente no local da lesão nervosa. Objetivo: Analisar os efeitos do LBI aplicado no local da lesão nervosa (LBIn) e/ou no músculo afetado por esta lesão (LBImm) sobre os aspectos morfológicos e a expressão gênica de miostatina e calcineurina no tecido muscular de ratos Wistar pós esmagamento do nervo isquiático. Metodologia: Serão utilizados 85 ratos Wistar (200-250g), sendo divididos aleatoriamente em 5 grupos: Controle, Lesão, Lesão+LBIn, Lesão+LBImm e Lesão+LBIn+LBImm (n=20/ grupo) analisados após 1, 2, 3 e 4 semanas. O procedimento de lesão do nervo isquiático esquerdo realizado pela técnica de esmagamento, utilizando uma pinça hemostática lisa com trava (6.3MPa) através de uma compressão de 30s. O tratamento com laser será iniciado após 2h com LBI (780nm, 0.04cm2, 1W/cm2, 3.2J) na área de lesão nervosa (20J/cm², 0.8J por ponto em 4 pontos), e/ou no músculo tibial anterior (10J/cm², 0.4J por ponto em 8 pontos). Ao término dos períodos experimentais, os músculos TA serão removidos cuidadosamente e serão pesados para determinação do grau de atrofia e da relação de massa muscular. Este tecido será também submetido a análise histológica dos aspectos morfológicos (diâmetro das fibras musculares, área de secção transversa, localização do núcleo e número total de vasos) utilizando coloração com hematoxilina & eosina (HE). Para a análise da expressão gênica o RNA total das amostras musculares será obtido utilizando reagente TRIzol®, o cDNA será sintetizado utilizando "kit High Capacity®" e será realizado qPCR com primers específicos de calcineurina e miostatina além de GAPDH que se refere ao gene constitutivo. Os dados serão submetidos a análise estatística adequada.