Para a análise foram colhidas amostras de pêlos com bulbos íntegros de 105 animais da raça Rottweiler (39 animais compondo 11 famílias completas - pai-mãe-filho - e 66 cães não aparentados até a segunda geração). As amostras foram tomadas ao acaso em diferentes canis dos estados de Minas Gerais e São Paulo, sendo mantidas à temperatura ambiente até a extração do DNA. A técnica de extração utilizada foi a permanente para pêlos, segundo protocolo do Veterinary Genetics Laboratorie (VGL) – UCDavis, Califórnia. Para permitir boa visualização dos alelos o primer CMR S (Shibuya et al., 1994) foi escolhido por apresentar diferença de comprimento de três pares de bases entre eles, suficiente para distinção por leitura visual. Para a amplificação empregou-se: 1,0µl de tampão 10X (50mM KCl, 10mM Tris-HCl pH8,3) com MgCl (Gibco) (1,5mM), 0,5µl de dNTPs (Gibco) (5,0mM), 0,4µl do primer F (5,0mM), 0,4µl do primer R (5,0mM), 0,14µl de Taq DNA polimerase (Promega) (5u/ul), 2,0µl (diluído a 10%) de DNA genômico extraído e 5,56µl de água Mili Q estéril qsp. As temperaturas utilizadas foram 94ºC para desnaturação, 62ºC para anelamento e 72ºC para extensão por 30 ciclos. A corrida eletroforética foi realizada em gel de poliacrilamida 8% por sete horas a 100 Volts. O método de coloração empregado foi o do nitrato de prata. Após a coloração os géis foram fotografados usando-se câmera digital (Sony Digital Mavica-MVC-FD5). As fotografias foram analisadas pelo programa Kodak Digital Science-1D Image Analysis Software. O peso molecular das bandas foi definido a partir do peso molecular padrão usado (pGEM Promega-2645-51).
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