Cromatografia de troca iônica (IEX)
Cromatografia de Troca Iônica (IEX) é a técnica usada para separar moléculas com base em sua carga elétrica. Moléculas carregadas positivamente se ligam a um trocador de cátions (CEX) e moléculas carregadas negativamente se ligam a um trocador de ânions (AEX).
A aplicação mais comum para o IEX é o polimento da molécula alvo, mas também pode ser usado para capturar o produto, como vetores virais.
Ceramic HyperD Q é um trocador de ânions forte que é adequado para a remoção de impurezas aniônicas (isto é, proteína da célula hospedeira e DNA). Seu grânulo de base de 50 µm oferece alta resolução para aplicações de polimento quando necessário.
Os sorventes para cromatografia de troca iônica Q, DEAE e CM Ceramic HyperD™ F são projetados usando o design proprietário 'gel-in-a-shell' que fornece rápida transferência de massa e ligação eficaz. Baseia-se em um hidrogel de alta capacidade, polimerizado dentro dos gigapores de um cordão de cerâmica rígido.
Alta capacidade de encadernação dinâmica a altas taxas de fluxo
Sorvente verdadeiramente rígido e não compressível
O absorvente CM Ceramic HyperD F tolerante ao sal reduz os requisitos de Ultrafiltração / Diafiltração (UF / DF)
Purificação de plasmídeo
Purificação de enzimas, proteínas plasmáticas
Captura direta de anticorpos monoclonais (CM Ceramic HyperD ™ F)
Adsorvente Q
Adsorvente CM
Capacidade dinâmica de ligação (mg / mL) 10% de avanço a 200 cm / h BSA*
Quantidade de grupos iônicos (µEq/mL)
Mudanças de volume devido ao pH e força iônica Não compressível
* BSA = Albumina Sérica Bovina
¹ 5 mg/mL BSA em 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
25 mg/mL hu IgG em 50 mM de acetato de sódio, 100 mM NaCl, pH 4.7
Sorventes de cerâmica HyperD F
Tamanho da embalagem Número da peça
Colunas de cromatografia pré-embaladas HyperD F de cerâmica para troca iônica
PDF | 774.2 KB | julho 21, 2020
O Ceramic HyperD DEAE é um trocador de ânions fraco para a purificação de polimento. Alterações na condutividade e no pH podem otimizar as etapas de purificação utilizando a alteração de carga nas proteínas e ligantes.
Os sorventes para cromatografia de troca iônica Q, DEAE e CM Ceramic HyperD™ F foram projetados usando o design proprietário 'gel-in-a-shell' que fornece rápida transferência de massa e ligação eficaz. Baseia-se em um hidrogel de alta capacidade, polimerizado dentro dos gigapores de um grânulo de cerâmica rígido.
Alta capacidade de ligação dinâmica a altas taxas de fluxo
Adsorvente DEAE
Capacidade dinâmica de ligação (mg / mL) 10% de avanço a 200 cm/h BSA*
Quantidade de grupos iônicos (µEq / mL)
Colunas Pré-embaladas PRC
Colunas pré-embaladas AcroSep
O Ceramic HyperD CM é um trocador de cátions fraco para aplicações de polimento. Alterações na condutividade e no pH podem otimizar as etapas de purificação utilizando a alteração de carga nas proteínas e ligantes.
Os sorventes de cromatografia de troca iônica HyperD F Q, DEAE e CM Ceramic são projetados usando o design proprietário 'gel-in-a-shell' que fornece transferência rápida de massa e ligação eficaz. Baseia-se em um hidrogel de alta capacidade, polimerizado dentro dos gigapores de um grânulo de cerâmica rígido.
O absorvente CM Ceramic HyperD ™ F tolerante ao sal reduz os requisitos de Ultrafiltração / Diafiltração (UF / DF)
O Hypercel Star AX é um trocador de ânions tolerante a sal com uma amina primária como grupo funcional. Ele pode ser facilmente integrado a um fluxo de trabalho de purificação sem manipulação do fluxo de alimentação.
Adsorbente avançado da cromatografia da troca do ânion da recuperação tolerante a sal
O HyperCel STAR AX é um adsorbente de cromatografia de troca aniônica escalonável projetado para captura de proteínas de alta produtividade com condutividade moderada ou mais alta do sal (2 a 15 mS / cm), típica de matérias-primas biológicas não diluídas (por exemplo, sobrenadantes da cultura de células de mamíferos, E. coli matéria-prima, plasma, outros ...).
As aplicações incluem captura direta de proteínas recombinantes, anticorpos monoclonais e policlonais, derivados de plasma ou outros produtos farmacêuticos.
Devido à sua capacidade de capturar diretamente proteínas de fluxos de alimentação não diluídos, o adsorbente HyperCel STAR AX também pode ser usado para remoção precoce de contaminantes (ou seja, proteínas da célula hospedeira CHO), antes da purificação do alvo, ou seja, antes da captura do MAb por uma etapa de afinidade da proteína A.
O sorvente HyperCel STAR AX é fabricado em larga escala e atende às necessidades de usuários industriais e autoridades reguladoras. Este sorvente oferece:
Alta capacidade de encadernação dinâmica (DBC) em um curto período de residência (2 minutos ou menos)
Captura direta de proteína de matéria-prima não diluída com condutividade moderada ou alta
Excelentes propriedades de vazão para processamento rápido de matéria-prima
Seletividade distinta, consistente em uma ampla faixa de condutividade (2 - 15 mS / cm)
Aplicação 1. Captura direta de albumina a partir de plasma não diluído
O objetivo é avaliar a resina HyperCel STAR AX como o primeiro passo em uma sequência de purificação em duas etapas para capturar albumina sérica humana (HSA) de plasma não diluído (condutividade 11 mS / cm). A resina HyperCel STAR AX foi usada como primeira etapa de captura, seguida por uma etapa de troca catiônica ortogonal realizada na resina S HyperCel, sem ajuste de pH ou condutividade do plasma. O plasma não diluído puro (pH 7,6, 11mS / cm) foi carregado com DBC de 30 mg / mL.
O Projeto de Experimentos (DoE) em placas de filtro de 96 poços foi realizado para determinar as condições ideais para alcançar a melhor relação rendimento / pureza.
Estas condições foram então transferidas para cromatografia em coluna em colunas pré-embaladas da RPC.
As condições determinadas em placas de 96 poços foram aplicadas à cromatografia de plasma não diluído em resina HyperCel STAR AX em uma coluna pré-embalada de 1 mL de PRC. As análises de cromatograma e SDS-PAGE das frações confirmaram que a maioria dos contaminantes foi eliminada por lavagem de alta condutividade, levando a uma fração de HSA 99% pura em uma única etapa, com rendimento de 90%.
Além disso, a resina HyperCel STAR AX usada na etapa de captura com plasma não diluído apresentava um DBC> 30 mg / mL, mais de 2 vezes maior que o de uma resina convencional de agarose DEAE testada nessas condições.
A HSA foi eluída por uma simples diminuição de pH (4,0), sem adição de sal, permitindo uma carga direta em uma coluna de troca catiônica ortogonal (resina S HyperCel).
Esta última etapa de polimento na resina S HyperCel levou a uma fração purificada de HSA eluída em pH 7,0 com pureza> 99% e capacidade em torno de 65 mg / mL.
Capacidade (mg/mL)
Caputa com resina HyperCel STAR AX
Plasma não diluído
Polimento com a S HyperCel
Eluato de pH 4,0 da resina HyperCel STAR AX
Aplicação 2. Remoção precoce de CHOPs antes da captura da proteína A de um anticorpo monoclonal (MAb)
O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto de uma etapa de pré-purificação usando a resina HyperCel STAR AX antes da captura convencional de resina de proteína A de um anticorpo monoclonal (MAb) da matéria-prima da cultura de células de mamíferos.
O conteúdo de CHOPs contaminantes (proteínas de ovário de hamster chinês) foi comparado usando um ensaio comercial ELISA para os dois esquemas de purificação.
Os dados mostram que o uso da resina HyperCel STAR AX antes da proteína A resulta em uma melhor redução de CHOP (> 8 vezes). Devido a esse efeito sinérgico, a partir de um conteúdo inicial de proteína de célula hospedeira (HCP) de 413.000 ppm, o nível final de CHOP é reduzido para ~ 400 ppm (redução de 3 log), com uma recuperação de MAb de 90%.
Uma etapa de pré-purificação pode impactar positivamente a economia do processo, prolongando a vida útil de uma coluna de proteína A dispendiosa usada como etapa padrão para a captura de MAb.
O adsorvente HyperCel STAR AX é composto por uma matriz rígida de celulose que possui excelentes propriedades de fluxo e gera baixa contrapressão, compatível com as necessidades da produção de proteínas em escala de fabricação. O adsorvente está disponível em uma variedade de configurações de embalagem, bem como nas convenientes colunas pré-embaladas PRC de 1 e 5 mL, projetadas para otimização rápida de métodos, triagem de seletividade ou pequenos trabalhos preparatórios. O sorvente HyperCel STAR AX é fornecido como uma pasta / suspensão em NaCl 1 M contendo 20% (v / v) de etanol ou como um bolo úmido para aplicações em escala de processo (o sorvente úmido do bolo facilita a transferência do sorvente, evitando a agitação e suspensão de grandes volumes de material).
O adsorvente HyperCel STAR AX possui uma estabilidade química que garante limpeza simples no local (CIP) e armazenamento. Para CIP padrão, recomenda-se o tratamento de NaOH 0,5 a 1 M, enquanto é possível o armazenamento a longo prazo em NaOH 10 a 100 mM.
Ligante de troca iônica Amina primária
>100 mg BSA/mL com range de pH 7.5 – 8.0 e condutividade 15 mS/cm
Faixa de operação típica de condutividade da matéria-prima
Condições de limpeza recomendadas 2
1 Determinado usando um BSA de 5 mg / mL em Tris-HCl 25 mM, NaCl 0,14 M em tempo de residência de 2 minutos.
2 Injeção de 5 volumes de coluna (CV) de 0,5 - 1 M NaOH, 1 hora de tempo de contato.
Resina HyperCel STAR AX
Colunas pré-embaladas HyperCel STAR AX PRC
PDF | 649.7 KB | julho 28, 2020
Membranas IEX
O Sartobind® Q é um forte trocador de ânions básico com amônio quaternário como ligante. Essa membrana é fornecida em dispositivos prontos para uso com duas alturas de leito diferentes.
O Sartobind® STIC PA é um trocador de ânions básico fraco e tolerante ao sal. O ligante é uma amina primária. Devido à sua tolerância ao sal, trabalha eficientemente com maior condutividade. Essa membrana é fornecida em dispositivos prontos para uso na altura padrão da cama.
O Sartobind® S é um forte trocador de cátions ácidos com um ácido sulfônico como ligante. Essa membrana é fornecida em dispositivos prontos para uso com duas alturas de leito diferentes.