Antígeno RhD: Du, D fraco, D parcial e testes laboratoriais | Biomedicina Padrão
Antígeno RhD: Du, D fraco, D parcial e testes laboratoriais
Por Brunno Câmara - terça-feira, julho 30, 2019
Tire todas suas dúvidas em relação ao antígeno D do sistema sanguíneo Rh.
O antígeno RhD
Fenótipo D negativo
Fenótipos D variantes (D fraco [Du] e D parcial)
Escolha dos soros reagentes anti-D
Confirmação de um resultado negativo
1. O antígeno RhD
Foi o primeiro grupo sanguíneo clinicamente importante a ser descoberto após a identificação do grupo ABO.
A frequência do fenótipo D+ (positivo) é cerca de 85% em caucasianos, 95% na África Subsaariana e maior que 99,5% no leste asiático.
Apesar de a maioria das pessoas serem D+ ou D- (negativo), existe uma área cinzenta em que se encontram variações do antígeno D, conhecidos como fenótipos D fraco, D parcial e DEL.
2. O fenótipo D negativo
Geralmente, resulta da total ausência da proteína RhD da membrana da hemácia.
A causa mais frequente do fenótipo D- é a completa deleção do gene RHD em homozigose.
Existem ainda casos de deleção em apenas um dos genes (heterozigose) ou a formação de um gene híbrido da junção de RHD com gene RHCE. Em todos esses casos, a proteína D normal/funcional não é formada.
3. Fenótipos variantes do antígeno D
D fraco (antigo DU)
O D fraco é uma variante do RhD em que a expressão do antígeno D (quantidade) encontra-se diminuída na superfície das hemácias.
Pelo menos 147 tipos de D fraco são conhecidos até o momento. Dependendo do tipo de antígeno presente, o paciente será classificado como D+ ou D-.
Para os tipos 1, 2 e 3 recomenda-se que sejam considerados como RhD positivos. Para os outros tipos a recomendação é que sejam classificados como RhD negativos.
O termo DU foi inicialmente usado para denominar antígenos D de hemácias que não aglutinavam com anti-D IgM, mas reagiam com anti-D IgG no teste de antiglobulina.
Com os modernos soros anti-D monoclonais, que possuem ambos anti-D IgG e IgM, a maioria das hemácias que seriam anteriormente classificadas como DU agora são consideradas como fenótipo D+ nos testes de rotina.
Atualmente, o termo DU é o equivalente do fenótipo D fraco sorológico.
DU = fenótipo D fraco sorológico
⚠ A recomendação é que os laboratórios utilizem a terminologia D fraco ao invés do termo DU.
D parcial
O fenótipo D parcial ocorre quando há substituição de um aminoácido em pelo menos uma das alças da região extracelular da proteína na membrana eritrocitária.
A maioria dos pacientes com fenótipo D parcial são considerado D+ pelos métodos sorológicos de rotina.
Os antígenos D parciais foram classificados em categorias (numerais romanos), que vão de DII a DVII. Posteriormente, após análises moleculares eles também são designados por nomes como DBT, DFR e DHAR.
Até o momento, 105 tipos de D parciais foram descritos. Desses, o mais comum é o DVI, sendo o mais provável de estar associado a formação de anti-D na população caucasiana.
O grande problema é que o DVI difere bastante do antígeno D normal. Se um paciente com DVI for classificado como D+, caso seja transfundido com hemácias D+, o organismo reconhecerá essas hemácias como estranhas e começará a produzir anti-D.
Então, muitos testes hoje em dia já são programados para não detectar o DVI e o paciente ser classificado como RhD-. Assim, o risco de uma aloimunização diminui.
4. Qual soro anti-D escolher?
Os reagentes monoclonais disponíveis atualmente são capazes de detectar vários epítopos de RhD. Existem outros que são um mistura de vários tipos de anticorpos monoclonais.
É importante estar atento que nenhum reagente será capaz de detectar todos os antígenos variantes. Sendo assim, o recomendado é a utilização de uma combinação de soros anti-D diferentes.
Não há um consenso em qual a melhor forma de detectar o antígeno D.
A recomendação é que se utilize dois reagentes:
Um reagente que possui uma mistura de anticorpos monoclonais que detectem a maioria dos D fracos e D parciais;
Um reagente monoclonal que não detecte a variante mais comum, ou seja, o DVI.
Atualmente, você pode encontrar cartões para tipagem em gel que incluem diversas variações para a tipagem RhD.
5. Confirmando um resultado RhD negativo
É importante lembrar que a investigação do RhD dependerá de sua finalidade. Geralmente, no laboratório clínico é feita apenas a confirmação do D fraco, nos casos em que o resultado inicial tenha dado negativo.
A reação será semelhante a de um coombs indireto, sendo que ao invés de colocar o plasma do paciente, será colocado o soro anti-D.
No caso de banco de sangue, a investigação deve ser mais detalhada, utilizando vários reagentes diferentes, para evitar ao máximo uma possível aloimunização.
Prepare uma suspensão salina (2 - 5%) das hemácias a serem testadas (paciente);
Colocar uma gota do soro anti-D em um tubo devidamente identificado.
Em um segundo tubo (controle negativo) colocar uma gota do reagente de controle Rh;
Acrescente uma gota da suspensão nos dois tubos (teste e controle).
Homogeneize bem o conteúdo;
Incube os tubos por 15 minutos à 37ºC;
Lave as hemácias dos tubos 3 vezes (aprenda como lavar aqui);
Adicione 2 gotas do reagente de antiglobulina humana para cada tubo. Homogeneize bem;
Centrifugue por 15 segundos a 3400 rpm;
a) agitar levemente o tubo;
b) observe se há aglutinação das hemácias;
c) faça a semi-quantificação do resultado (0, +, ++, +++).
Técnica em gel
Prepare uma suspensão de hemácias a 1%:
a) Centrifugue o tubo com a amostra para sedimentar as hemácias;
b) 1000 µL da solução de diluição (consulte a marca do kit);
c) 10 µL das hemácias concentradas por centrifugação;
Pipete 50 µL da suspensão no microtubo do cartão específico para Coombs (consulte a marca do kit);
Pipete 25 µL do soro anti-D no microtubo;
Incube durante 15 minutos a 37ºC;
Centrifugue de acordo com as recomendações da marca do kit;
Realize a leitura e faça a semi-quantificação.
A maioria dos D fracos sorológicos são detectados quando mulheres grávidas, potenciais receptores de transfusão ou doadores de sangue possuem uma tipagem para RhD com fraca aglutinação (≤ 2+), usando reagentes anti-D potentes.
6. Interpretação dos resultados em laboratório clínico
Anti-D negativo e pesquisa de D fraco negativo = fator RhD negativo;
Anti-D negativo e pesquisa de D fraco positiva = fator RhD positivo;
Lembrando que é necessário reportar os resultados dos dois testes que foram realizados, e não apenas colocar o resultado do teste confirmatório.
Em bancos de sangue a investigação deve ser mais detalhada, e dependerá se a pessoa será a doadora ou a receptora do concentrado de hemácias.
Daniels, G. (2013), Variants of RhD – current testing and clinical consequences. Br J Haematol, 161: 461-470. doi:10.1111/bjh.12275
Sandler SG, Chen LN, Flegel WA. Serological weak D phenotypes: a review and guidance for interpreting the RhD blood type using the RHD genotype. Br J Haematol. 2017;179(1):10–19. doi:10.1111/bjh.14757