O interesse na utilização da glicerina bruta na alimentação animal ressurge, devido ao aumento na disponibilidade e preço favorável, como conseqüência da expansão das indústrias de biocombustíveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da substituição do milho por diferentes níveis de glicerina bruta na dieta sobre a fermentação ruminal através da digestibilidade in vitro verdadeira. As dietas experimentais consistiram na substituição do milho por glicerol (0; 4; 8 e 12%) na matéria seca da dieta (MS). As dietas eram compostas por 60% de feno de alfafa e 40% de grão de milho e o glicerol foi adicionado, substituindo o milho nas dietas. Além de trabalhar com as 48 horas tradicionais, foram utilizados diferentes horários de digestibilidade in vitro (0; 4; 8; 16; 48; 72 e 96 horas), com a finalidade de estudar a cinética da digestão. A substituição do milho por níveis crescente de glicerina bruta na dieta não afetou a concentração de N-NH3, o teor de energia metabolizável, as digestibilidades in vitro da matéria orgânica da fibra em detergente neutro, bem como os parâmetros da degradação ruminal. Portanto, esse subproduto da produção do biodiesel deve ser testado in vivo como uma alternativa energética na formulação de dietas para ruminantes.