http://dx.doi.org/10.1590/S0021-75572001000400017
Abertina Rosa-BorgesI; Márcia G. SampaioII; Antônio Condino-NetoIII; Orlando C.O. BarretoIV; Victor NudelmanV;
Magda M.S. Carneiro-SampaioVI; Susie A. NogueiraVII; Thalita F. de AbreuVIII; Jussara RehderIX; Beatriz T. Costa-CarvalhoX
IPós-graduanda da Disc. de Alergia, Imunologia Clínica e Reumatologia do Depto. de Pediatria da Univ. Federal de São Paulo (UNIFESP/EPM)
IIMestranda do curso de Doenças Infecciosas e Parasitárias do Depto. de Medicina Preventiva da Fac. de Medicina da Univ. Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
IIIProf. Assistente Doutor do Centro de Investigação em Pediatria e do Depto. de Pediatria. Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP
IVProf. Associado da Fac. de Medicina da Univ. de São Paulo (USP)
VPesquisador associado da Disciplina de Alergia, Imunologia Clínica e Reumatologia do Depto. de Pediatria da UNIFESP/EPM
VIProfª Titular do Depto. de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da USP
VIIProfª Adjunta do Depto. de Medicina Preventiva da Fac. Med. da UFRJ
VIIIProfª Assistente do Depto. de Pediatria da Fac. de Medicina da UFRJ
IXBióloga do Centro de Investigação em Pediatria e Depto. de Pediatria. Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP
XProfessora Adjunta da Disciplina de Alergia, Imunologia Clínica e Reumatologia do Depto. de Pediatria da UNIFESP-EPM
Palavras-chave: deficiência de glucosefosfato desidrogenase, síndromes de deficiência imunológica, neutrófilos, doenças granulomatosa crônica, anemia hemolítica congênita.
OBJECTIVE: To report a case of rare neutrophil functional disorder with clinical and laboratory findings similar to those of chronic granulomatous disease.
METHODS: Patient with extremely reduced level of glucose-6-phosphate dehydrogenase and recurrent infections that improved after continuous use of cotrimoxazole. The patient presented leukocytes with defective respiratory burst, similar to what occurs in chronic granulomatous disease.
COMMENTS: The diagnosis of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in neutrophils should be considered in any patient with hemolytic anemia whose level of G6PD is extremely low or in any patient that presents recurrent infections as differential diagnosis of chronic granulomatous disease.
Keywords: glucosephosphate dehydrogenase deficiency, immunodeficiency syndromes, chronic granulomatous disease, neutrophilis, congenital hemolytic anemia.
A deficiência da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) afeta mais de 200 milhões de pessoas no mundo. Apresenta freqüência relativamente alta em negros americanos (13%) e populações do mediterrâneo (5 a 40%) 1. Possui herança ligada ao X e tem como principal manifestação a anemia hemolítica. A hemólise pode ser desencadeada por infeções e por algumas drogas com propriedades oxidativas como o ácido acetil salicílico, a vitamina K, o cloranfenicol e antimaláricos 2. A G6PD presente nos neutrófilos e eritrócitos é codificada pelo mesmo gene 3, localizado no cromossomo Xq28 e tende a sofrer freqüentes mutações, tendo sido relatadas mais de 200 variantes 4.
Níveis muito baixos de G6PD (abaixo de 5% do normal) nos neutrófilos podem ser encontrados em algumas raras mutações, levando à falha no metabolismo oxidativo e conseqüente redução da atividade microbicida dependente de oxigênio dos fagócitos. Nesses raros casos, os pacientes com deficiência de G6PD tornam-se susceptíveis a infeções de repetição. Menos de 10 casos foram descritos na literatura. O diagnóstico é estabelecido avaliando o nível da atividade da G6PD nos neutrófilos 3.
Hemogramas pregressos: anemia, leucocitose, neutrofilia e eosinofilia; hemograma atual: melhora dos parâmetros hematológicos (Tabela 1). Níveis de imunoglobulinas (IgG, IgA, IgM) aumentados (Tabela 2), Anticorpo (IgG) positivo para sarampo e rubéola e negativo para vírus da imunodeficiência adquirida. Subpopulacões de linfócitos CD3, CD4 e CD8 com valores normais. Reação de Mantoux de 11mm. A avaliação do sistema complemento pelo CH50 mostrou atividade normal.
A atividade bactericida dos neutrófilos para microorganismos catalase-positivos depende primariamente de intermediários reativos de oxigênio (ânion superóxido, oxigênio e peróxido de hidrogênio), liberados pela ativação da enzima NADPH oxidase, reação conhecida como metabolismo oxidativo dos neutrófilos (5). O metabolismo oxidativo burst oxidativo) é caracterizado por um aumento abrupto no consumo de oxigênio (O2) e sua redução parcial a ânion superóxido (O2-). O NADPH é doador específico de elétrons para oxigênio de acordo com a reação:
NADPH + 2O2® NADP+ + H+ + 2O2- 6
O O2-, ao agir como um oxidante, é reduzido para peróxido de hidrogênio (H2O2)6, que é diretamente tóxico para os microorganismos 7.
A fonte contínua de NADPH para os fagócitos é a via das hexoses monofosfato. A G6PD é a primeira enzima desta via (hexose monophosphate shunt), onde a glicose-6-fosfato (Glucose-6-P) é convertida para 6 fosfogluconato (6-PG) ao mesmo tempo que NADP+ é reduzida para NADPH, substrato para metabolismo oxidativo 5. Quando o nível de G6PD nos neutrófilos é menor que 5% do normal 3, o shunt não é ativado, e a atividade bactericida dos fagócitos é bloqueada.
Na maioria dos tipos de deficiência de G6PD, os níveis nos neutrófilos estão entre 20 e 75% do normal. Níveis maiores que 5% de G6PD aparentemente são suficientes para reciclar NADP+ em NADPH em uma velocidade que permite ativação do metabolismo oxidativo e proteção adequada contra infeções por microorganismos 3.
A enzima NADPH oxidase é composta por vários componentes localizados na membrana plasmática dos fagócitos. A unidade enzimática da NADPH oxidase é composta por uma proteína chamada citocromo B 558 (uma cadeia de 91kDa (gp91phox) e uma cadeia de 22kDa (p22phox), e duas proteínas do citosol de 47 e 67 kda (p47-phox e p-67-phox, respectivamente) 4 (Figura1) 1.
Deficiência de qualquer dos componentes da enzima NADPH oxidase leva ao prejuízo da função microbicida dos fagócitos, em particular contra patógenos catalase-positivos, característica da doença granulomatosa crônica (DGC) 8.
Portanto, tanto na DGC como na deficiência da G6PD, ocorre um defeito na capacidade bactericida dos neutrófilos 4.
Microorganismos produtores de H2O2 que não contêm catalase (ex. Streptococcus e Haemophilus influenzae) são facilmente destruídos por neutrófilos de pacientes com DGC e deficiência da G6PD 6, pois seu H2O2 endógeno não é destruído pela catalase, sendo capaz de suprir as células deficientes com derivados tóxicos de oxigênio.
No teste do NBT as células fagocitárias são ativadas por estímulos apropriados na presença do corante (cor amarela), que funciona como receptor de elétrons, e se reduz quando em contato com os intermediários reativos de O2, mudando para a cor azul, podendo ser quantificado no citoplasma dos neutrófilos, facilmente visualizados no microscópio comum 6.
Outro método para avaliar a atividade do metabolismo oxidativo é a medida direta do consumo de O2, produção de O2- ou produção H2O2 9. A dosagem específica do O2- é importante, pois mostra se o defeito no metabolismo oxidativo ocorreu em sua etapa inicial 6.
A citometria de fluxo também é usada para diagnosticar defeitos do metabolismo oxidativo por apresentar resultados rápidos e precisos 10. É medida a produção de H2O2 de neutrófilos ativados com Phorbol-myristate-acetate (PMA), após coloração com Dihydrorhodamina 123 (DHR), substância que se liga aos neutrófilos, causando aumento da fluorescência na presença do H2O2 11.
Embora os métodos de detecção do O2- e H2O2 sejam mais sensíveis e específicos para a avaliação do metabolismo oxidativo, o NBT continua sendo o método de referência para screening da DGC 2.
Os pacientes com DGC não conseguem reduzir o NBT para a cor azul, e, em algumas variantes raras, é possível detectar fraca redução. Assim como na DGC, quando a deficiência de G6PD é acentuada, o teste do NBT também é alterado 4 e a produção de H2O2 e O2- diminuída.
A DGC é uma deficiência funcional rara, primária, do sistema fagocitário. Geneticamente heterogênea, é caracterizada por infeções graves e de repetição associadas a uma disfunção microbicida dos fagócitos devido a falha no sistema NADPH oxidase 8. Mutações no gene (localizado no braço curto do cromossomo X) que codifica o flavocitocromo gp 91-phox (componente do sistema NADPH oxidase) é responsável por 60-65 % dos casos de DGC 12. O restante apresenta herança autossômica recessiva. A DGC é a disfunção de fagócitos melhor descrita e entendida 7.
O quadro clínico da deficiência de G6PD, na maioria dos casos, é a anemia hemolítica. Quando a deficiência é acentuada, a apresentação clínica é a mesma da DGC 4. Infeções de repetição por microorganismos catalase-positivo (Staphylococcus aureus, enterobactérias como Salmonella, Serratia marcescens, Escherichia coli, Nocardia, fungos como Candida albicans e, principalmente, Aspergillus) 2 são freqüentes. Foram relatados casos de septicemia por Chromobacterium violaceum em pacientes com DGC e Deficiência de G6PD, sugerindo que essas disfunções de neutrófilos resultem em uma susceptibilidade à infeção por este patógeno 13.
Os locais mais acometidos são pulmões, fígado, pele, trato gastrintestinal e linfonodos. A osteomielite, quando presente, é de resolução difícil. Foram relatadas lesões dos olhos, incluindo córnea e retina. A morte normalmente resulta de infeções fúngicas, principalmente causadas por espécies de Aspergillus 9.
As bactérias são fagocitadas, mas não são destruídas; dessa forma, esses pacientes tendem a desenvolver abcessos e granulomas crônicos, que podem levar a complicações não infeciosas como hepatoesplenomegalia, linfoadenopatia, hipergamaglobulinemia, diarréia crônica e obstrução granulomatosa em certos órgãos, podendo ser fatais 9.
Os sintomas e sinais clínicos aparecem durante os dois primeiros anos de vida na maioria dos pacientes. Algumas das crianças apresentam seus primeiros sintomas no período neonatal. Linfoadenopatia está presente em quase todos os casos e, geralmente, é uma das primeiras manifestações da doença. Abcessos hepáticos e periepáticos podem ser, ocasionalmente, os primeiros achados 9.
O tratamento da deficiência de G6PD é evitar hemólise Em casos acentuados é semelhante ao da DGC, sendo indicada profilaxia com cotrimoxazol, por reduzir a incidência de infeções com risco de vida 3,9. Apesar do risco de esta droga desencadear hemólise nos pacientes com deficiência de G6PD, por apresentar propriedades oxidativas 1, estudos e relatos da literatura indicam que o cotrimoxazol raramente causa hemólise na população com deficiência de G6PD 14.
A profilaxia com antifúngicos não está indicada, pois apresenta eficácia duvidosa e efeitos colaterais importantes 2. Deve ser feito uso precoce e agressivo de antibióticos por via parenteral para erradicar infeções 3,9.
Em infeções com risco de vida, a transfusão de leucócitos pode ser útil, entretanto, tem sido raramente utilizada. A obstrução por granulomas em órgãos vitais pode regredir com o uso de hidrocortisona. Esse tratamento, entretanto, é controverso e deve ser realizado com cautela 9.
O Interferon-Gama (INF-g) ativa macrófagos in vivo e in vitro, por estimular a NADPH oxidase e aumentar a síntese de intermediários reativos de oxigênio, aumentando sua atividade microbicida em indivíduos saudáveis 6. A terapia com Interferon Gama recombinante humano (rHuIFN-g) foi recentemente usada em pacientes com DGC com redução do risco relativo de infeções graves em 70% dos casos 6. Embora não tenha reconstituído a atividade metabólica oxidativa na maioria dos pacientes, algumas variantes de DGC – como o defeito na gp91phox e as deficiências de proteína do citosol – apresentaram melhora na resposta oxidativa 8. O mecanismo pelo qual rHuIFN-g beneficia pacientes com DGC não é ainda totalmente conhecido 6,15. Sua eficácia na deficiência de G6PD não foi demonstrada 3,9.
Quando a DGC foi inicialmente diagnosticada, era considerada uma doença granulomatosa fatal. Pacientes hoje diagnosticados têm melhor prognóstico, mas a mortalidade e morbidade ainda são significativas 7. Apesar do tratamento agressivo, muitos pacientes com DGC morrem antes da adolescência 2.
O prognóstico da deficiência acentuada de G6PD não é claro pelo pequeno número de casos descritos 3.
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