Wie viele Zellen sollte ich in jede Vertiefung setzen?
¿Cuántas células debo sembrar en cada pocillo?
Streben Sie zu Beginn des Experiments 95-100% konfluente Monolayer um die Zellausschlusszone an. Die Aussaat einer höheren Dichte kann dazu führen, dass sich zu Beginn des Versuchs Zellen in der Erkennungszone befinden, während die Aussaat einer geringeren Dichte dazu führt, dass nach der Migration weniger Zellen in die Erkennungszone wandern. In der Regel werden 20.000 - 75.000 Zellen pro Vertiefung in Oris und Oris Pro 96-Well-Platten und 2.500 - 10.000 pro Vertiefung in Oris Pro 384-Well-Platten ausgesät. Für Ihr erstes Experiment empfehlen wir Ihnen, mehrere verschiedene Zellaussaatdichten zu testen, wie in Anhang 1 in der Testprotokoll. Für Oris 3D Embedded Invasion Assays empfehlen wir eine Aussaat von 30.000 - 50.000 Zellen pro Vertiefung. Bei einigen Zelllinien können bis zu 75.000 Zellen pro Vertiefung ausgesät werden, aber viele invasive Zelllinien exprimieren hohe Mengen an Matrix-Metalloproteinasen, die das Kollagen so weit abbauen können, dass es kollabiert oder sich bei hohen Zelldichten sogar verflüssigt. Durch die Zugabe von weniger Zellen wird dieses Problem gemildert.
Al inicio del experimento, el objetivo es obtener monocapas confluentes 95-100% alrededor de la zona de exclusión celular. La siembra a una densidad más alta puede dar lugar a células en la zona de detección al principio del ensayo, mientras que la siembra a una densidad más baja producirá menos células migratorias en la zona de detección después de la migración. Normalmente, se siembran entre 20.000 y 75.000 células por pocillo en placas Oris y Oris Pro de 96 pocillos, y entre 2.500 y 10.000 por pocillo en placas Oris Pro de 384 pocillos. Para su primer experimento, le recomendamos que pruebe diferentes densidades de siembra de células, tal como se describe en el Apéndice 1 de la Guía del usuario. protocolo de ensayo. Para los ensayos Oris 3D Embedded Invasion, recomendamos sembrar entre 30.000 y 50.000 células por pocillo. Se pueden sembrar hasta 75.000 células por pocillo para algunas líneas celulares, pero muchas líneas celulares invasivas expresan altos niveles de metaloproteinasas de matriz que pueden degradar el colágeno hasta el punto de colapsarlo o incluso licuarlo a altas densidades celulares. Añadir menos células mejora este problema.