Wie sollte ich vor der Migration/Invasion Referenzbrunnen anlegen?
¿Cómo debo establecer los pozos de referencia previos a la migración/invasión?
Prä-Migrations-/Invasions-Referenzvertiefungen werden verwendet, um die Größe und Position der Erfassungszone zu bestimmen, damit das Ausmaß der Bewegung in den Versuchsvertiefungen quantifiziert werden kann. Bei Oris Assays können Sie einige Stopfen an Ort und Stelle lassen, bis Sie die Ergebnisse ablesen. Da Oris Pro Assays keine Stopfen haben, ist diese Methode nicht anwendbar. Für Oris Pro und Oris Assays gibt es alternative Methoden zur Erstellung von Referenzvertiefungen: Sammeln Sie einfach Bilder zum Zeitpunkt Null, wenn die Migration beginnt. Geben Sie das Fixiermittel zu Beginn des Tests in die Replikationsvertiefungen oder in die Replikationsplatte. Bei der Fixierung von Zellen in einer Untergruppe von Vertiefungen in der Platte besteht jedoch die Gefahr, dass die Zellen neben den fixierten Vertiefungen durch die Dämpfe des Fixiermittels beeinträchtigt werden. Geben Sie zu Beginn des Tests einen Migrations- oder Invasionsinhibitor, wie z. B. Cytochalasin D, in die Referenzvertiefungen. Achten Sie darauf, dass Sie genügend Inhibitor hinzufügen, um die Zellbewegung vollständig zu blockieren. Lesen Sie auch den zugehörigen Anwendungshinweis hier.
Los pocillos de referencia previos a la migración/invasión se utilizan para establecer el tamaño y la posición de la zona de detección con el fin de cuantificar el alcance del movimiento en los pocillos experimentales. Para los ensayos Oris, puede dejar algunos tapones en su lugar hasta que lea los resultados. Dado que los ensayos Oris Pro carecen de tapones, este método no es aplicable. Para los ensayos Oris Pro y Oris, existen métodos alternativos para establecer pocillos de referencia: Basta con recoger las imágenes en el momento cero, cuando la migración está a punto de comenzar. Añadir fijador a los pocillos de réplica o a una placa de réplica al principio del ensayo. Sin embargo, cuando se fijan células en un subconjunto de pocillos de la placa, este método puede afectar a las células adyacentes a los pocillos fijados, ya que pueden quedar expuestas a los vapores del fijador. Añada un inhibidor de la migración o la invasión, como la citocalasina D, a los pocillos de referencia al principio del ensayo. Asegúrese de añadir suficiente inhibidor para bloquear completamente el movimiento celular. Si lo desea, puede leer una nota de aplicación relacionada aquí.