Wie sollte ich wandernde/eindringende Zellen in Oris Assays färben?
¿Cómo debo teñir las células migratorias/invasoras en los ensayos Oris?
Zellen sind in der Regel unter Hellfeldoptik ohne Färbung sichtbar, insbesondere wenn Phasenkontrastoptik vorhanden ist. Mit einer Färbung sind die Zellen jedoch leichter zu erkennen und können physiologische Zustände zeigen, die mit der Hellfeldoptik nicht erkennbar sind. Bei den Oris Assays gibt es keine Einschränkungen bei der Wahl der Färbung, und Sie können auf Wunsch mehrere Färbungen gleichzeitig verwenden. Zur Quantifizierung der Migration/Invasion über den Flächenschluss empfehlen wir eine fluoreszierende zytoplasmatische Färbung wie TRITC-Phalloidin, um die Signale für Ihren Detektor zu maximieren. Um die Migration/Invasion durch Zählen der Zellen zu quantifizieren, empfehlen wir eine Kernfärbung wie DAPI. Durch die Beschränkung der Färbung auf die Zellkerne entstehen kleinere Objekte für die Bildgebung als bei zytoplasmatischen Färbungen, was eine bessere Trennung zwischen einzelnen Zellen und somit eine genauere Zählung ermöglicht. Sie können auch in Erwägung ziehen, die Zellen vor der Aussaat in den Oris-Assays vorzufärben. Einige Färbemittel können jedoch die Migration und/oder Invasion beeinflussen, was zu experimentellen Artefakten führen kann.
Las células suelen ser visibles con la óptica de campo claro sin tinción, especialmente si se dispone de óptica de contraste de fases. Sin embargo, la tinción facilita la visualización de las células y puede revelar estados fisiológicos que la óptica de campo claro no puede revelar. Los ensayos Oris no imponen restricciones en cuanto a la elección de la tinción y, si lo desea, puede utilizar varias tinciones simultáneamente. Para cuantificar la migración/invasión mediante el cierre del área, recomendamos una tinción citoplasmática fluorescente como TRITC-phalloidin con el fin de maximizar las señales para su detector. Para cuantificar la migración/invasión mediante el recuento de células, recomendamos una tinción nuclear como DAPI. Al restringir la tinción a los núcleos se crean objetos más pequeños para la obtención de imágenes que con las tinciones citoplasmáticas, lo que proporciona una mayor separación entre las células individuales y, por tanto, recuentos más precisos. También puede considerar la posibilidad de preetiquetar las células antes de sembrarlas en los ensayos Oris. Sin embargo, algunas tinciones pueden afectar a la migración y/o la invasión, lo que puede crear artefactos experimentales.