Comment dois-je colorer les cellules migrantes/envahissantes dans les tests Oris ?
이동/침입하는 세포를 Oris Assays에서 어떻게 염색해야 합니까?
Les cellules sont généralement visibles en champ clair sans coloration, surtout si l'on dispose d'une optique à contraste de phase. Cependant, la coloration rend les cellules plus faciles à voir et peut révéler des états physiologiques que l'optique en champ clair ne peut pas révéler. Les tests Oris n'imposent aucune restriction quant au choix de la coloration, et vous pouvez utiliser plusieurs colorations simultanément si vous le souhaitez. Pour quantifier la migration/invasion par fermeture de zone, nous recommandons une coloration cytoplasmique fluorescente telle que la TRITC-phalloïdine afin de maximiser les signaux pour votre détecteur. Pour quantifier la migration/invasion en comptant les cellules, nous recommandons une coloration nucléaire telle que le DAPI. Le fait de limiter la coloration aux noyaux crée des objets plus petits pour l'imagerie que les colorations cytoplasmiques, ce qui permet de mieux séparer les cellules individuelles et donc de les compter plus précisément. Vous pouvez également envisager de pré-marquer les cellules avant de les ensemencer dans les essais Oris. Cependant, certaines colorations peuvent avoir un impact sur la migration et/ou l'invasion, créant potentiellement des artefacts expérimentaux.
특히 위상차 광학 장치를 사용할 수 있는 경우, 세포는 일반적으로 염색 없이도 밝은 필드 광학 장치에서 볼 수 있습니다. 그러나 염색을 하면 세포를 더 쉽게 볼 수 있고, 명시야 광학으로는 볼 수 없는 생리학적 상태를 밝힐 수 있습니다. Oris Assays는 염색 선택에 제한을 두지 않으며 원하는 경우 여러 염색을 동시에 사용할 수 있습니다. 영역 폐쇄를 통한 이동/침입을 정량화하려면 탐지기의 신호를 최대화하기 위해 TRITC-팔로이딘과 같은 형광 세포질 염색을 권장합니다. 세포 수를 세어 이동/침입을 정량화하려면 DAPI와 같은 핵 염색을 권장합니다. 염색을 핵으로 제한하면 세포질 염색보다 이미징할 수 있는 물체가 더 작아져 개별 세포를 더 잘 분리할 수 있으므로 더 정확하게 카운트할 수 있습니다. Oris 분석에서 시딩하기 전에 세포를 사전 라벨링하는 것도 고려할 수 있습니다. 그러나 일부 염색은 이동 및/또는 침입에 영향을 미쳐 잠재적으로 실험적 아티팩트를 생성할 수 있습니다.