|Proje Adı||Proje Başlangıç Yılı||Proje Bitiş Yılı||Proje Özeti||Proje Lideri|
|Yerli Kara Sığırı İçin Uygulanan, Hayvan Genetik Kaynaklarının Yerinde Korunması Desteklemesinin Hayvancılık İşletmeleri Üzerinde Sosyo-Ekonomik Etkisi ||2019||2019|| ||İlker ÜNAL|
|İn Vitro Embriyo Kültür Medyumlarına ve Sperma Dilüsyon Solüsyonlarına İlave Edilen Eritroproteinin Spermatolojik Parametreler, Oksidatif Stres ve Embriyo Gelişimi Üzerine Etkileri||2013||2015||Çalışmanın amacı, boğa spermasının dondurulmasında kullanılan dilusyon solüsyonları ve in vitro embriyo kültür medyumuna ilave edilen eritropoietinin antioksidan etkiliğinin araştırılmasıdır. Boğalardan alınan spermaların dondurulması esnasında sulandırıcılara farklı dozlarda eritropoietin ilave edilerek donduruldu. Çözüm sonu biyokimyasal parametreler (oksidatif stres) ve spermatolojik parametreler incelendi. İkinci aşamasında ise sığır ovaryumlarından elde edilen oositlerin in vitro maturasyonu ve fertilizasyonlarını izleyen süreçte eritropoietinin farklı miktarlarını içeren kültür ortamına alınarak bölünen osit oranları ve blastosiste erişim oranları değerlendirildi.||Muharrem SATILMIŞ|
|Farklı Sulandırıcılar ile Dondurulan Boğa Spermalarında İn - vitro ve İn - vivo Değerlendirmeler||2012||2013||Bu çalışmanın amacı boğa spermasının farklı sulandırıcılar ile dondurulmasının in vitro ve in vivo sonuçlarını karşılaştırmaktır. Çalışmada bitkisel içerikli (Cryobos, Bioxcell) ve yumurta sarısı içeren (Tris, Medium 199) sulandırıcılar kullanılmıştır. |
Bu araştırmada üç baş boğadan haftada iki defa suni vajina ile ejakülat alınmıştır. Nativ sperma spermatolojik analizlerden sonra sulandırılmış ve +4 0C'de 4 saat bekletilerek gerçekleştirilen ekilibrasyon işlemi sonrası her bir sulandırıcı ve 0,25'lik payetlere çekilerek otomatik dondurma makinası ile dondurulup -196 0C'de sıvı azot içersinde saklanmıştır. Payetler 37 0C'deki su banyosunda 20 saniyede çözülmüş ve çözüm sonu spermatolojik özellikler (anormal spermatozoa oranı, plazma membran bütünlüğü) belirlenmiş, CASA cihazı ile spermatozoonun kinetik özellikleri (motilite, VAP, VSL, VCL, ALH, BCF, STR, LIN, ELON) belirlenmiştir. Ayrıca sulandırıcıların in vivo sonuçlarının belirlenmesi için her bir sulandırıcıdan 147 toplamda 588 payet ile suni tohumlama yapılmıştır. 60. günde rektal muayene yapılarak ineklerin gebe olup olmadıkları belirlenmiştir. Böylece sulandırıcıların ilk tohumlama sonucu gebelik oranı ve sulandırıcıların toplam tohumlama sonucu gebe kalan inek oranları tespit edilmiştir.
Çözüm sonu Cryobos, Bioxcell, Tris, Medium 199 sulandırıcıları için sırasıyla motilite 35,10±2,33, 32,90±2,42, 29,71±2,19, 14,43±0,89 olarak bulunmuştur. CASA verilerine göre (VAP, VSL, VCL, ALH, BCF, STR, LIN) fark oluşturan sulandırıcı Medium 199 olmuştur. En yüksek plazma membran bütünlüğünü 1 nolu boğada Cryobos sulandırıcısı ile elde edildiği (58,29±1,91) ve en düşük plazma membran bütünlüğü 3 nolu boğada Medium 199 sulandırıcısı ile elde edildiği (47,29±1,78) tespit edilmiştir. En yüksek anormal spermatozoa oranı 3 nolu boğanın Tris sulandırıcısında 22,10±0,70 ve en düşük anormal spermatozoa oranı 3 nolu boğanın Medium 199 sulandırıcısında 14,00±1,32 bulunmuştur. İlk tohumlama sonucu gebe kalan dişi oranı %22, %25, %18, %28 ve toplam tohumlama sonucu gebe kalan dişi oranı %52, %54, %49, %58'dir.
Elde edilen verilerin istatistiksel analizi sonucu boğalar arası fark bulunamamıştır. Sulandırıcılar arası fark ise Medium 199'dan kaynaklanmaktadır. İlk tohumlama sonucu ve son tohumlama sonucu gebelik oranları bakımından sulandırıcılar arasında istatistiksel fark bulunamamıştır. Bu çalışmada kullanılan Medium 199'un günümüz sulandırıcılarına iyi bir alternatif olabileceği gözlemlenmiştir.
|Serhat BÜYÜKLEBLEBİCİ|
Rasyon Çinko Miktarının Boğalarda
Sperma Miktar ve Kalitesine Etkisi
|2011||2012||Projeye Nisan 2011 yılında başlanacak olup Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü bünyesinde mevcut ve sperma üretiminde kullanılan Holstain ve esmer ırkı boğalarda uygulanacaktır. Proje için kontrol (n=6) ve 2 seviye grubu (her grup 6 şar baş) olmak üzere toplam 18 baş hayvan kullanılacaktır. Kontrol grubuna Enstitü bünyesinde üretimi yapılan 40 mg/kg çinko içeren yem ile yemleme yapılacaktır. 1. gruptaki hayvanlara kontrol grubundaki hayvanlarda olduğu gibi Enstitü bünyesindeki mevcut normal yemleme programına ilave olarak günlük 110 mg/kg ilave çinko verilerek 150 mg/kg çinko seviyesi test edilecek, 2. gruptakilere 160 ppm ilave çinko verilerek 200 mg/kg seviyesi test edilmiş olacaktır. Tüm gruplardan sperma sağım kalite kontrol ve dondurma programı sonrası elde edilecek veriler ışığında çinkonun sperma kalitesi üzerine etkisine bakılacaktır. Sperma sağımı yapılan hayvanlarda sağımı müteakip kan alınarak kan çinko miktarları da takip edilecektir. Yapılan inceleme ve analizler sonucunda rasyondaki çinko miktarının sperma miktar ve kalitesine etkisi incelenecektir.||Dr. Engin Ünay|
|Süt sığırlarında besin madde tüketimi |
ve bazı metabolizma değerleri ile döl
verimi ilişkilerinin saptanması
|2011||2015||Proje 191 baş Siyah Alaca süt sığırının 3 farklı döneminde (Kuru Dönem, Pik Dönemi ve İlk Tohumlamayı müteakip 25-30 gün sonraki dönem) gereksinimleri, gereksinimlerinin karşılanma oranları ve bazı kan parametreleri ile bazı döl verimi parametreleri (servis periyodu (SP), buzağılama aralığı (BA) ve tohumlama sayısı (THS)) arasındaki ilişkilerin irdelenmesi amacıyla yürütülmüştür. Bu amaçla hayvanlardan Kuru Dönem, Pik Dönemi ve Tohumlama Döneminde alınan kanlardan Kan Üre Azotu (BUN), Glikoz, İnsülin, Esterleşmemiş Yağ Asitleri (NEFA) ve Beta Hidroksibütirik Asit (BHB) analizleri yapılmıştır. Aynı dönemlerde hayvanların gereksinimleri NRC 2001 referans değerleri formülleri yardımıyla hesaplanmıştır. İşletme kayıtlarından hayvanlara ait döl ve verim kayıtları temin edilmiştir. Elde edilen parametre ve verim kayıtları arasındaki ilişkiler uygun istatistik metotlarla yorumlanmaya çalışılmıştır. Yapılan kan analizleri sonucunda dönemlere göre ortalamalar BUN için sırasıyla 10.29±0.453, 26.15±0.642, 28.10±0.701 mg/dL; Glikoz için sırasıyla 70.24±0.986, 53.71±0.937, 60.72±0.718 mg/dL; İnsülin değeri için sırasıyla 4.77±0.053, 5.04±0.152, 4.72±0.175 µıu/mL; NEFA değeri için sırasıyla 0.382±0.0129, 0.445±0.0145, 0.334±0.0099 mmol/L; BHB değeri için sırasıyla 0.388±0.0238, 0.446±0.0286, 0.332±0.0200 mmol/L olarak tespit edilmiştir. Kan değerleri yönünden dönemler arasındaki fark BUN, Glikoz, NEFA ve BHB yönünden istatistiki olarak önemli (p<0,01) bulunmuştur. |
Tohumlama dönemi döl verimi parametreleri ile kan parametreleri yönünden kanonik korelasyon analizi sonuçlarına göre incelenen kan değerlerinin önemli (p=0,00131) etkisi olduğu ortaya konulmuştur. İlk tohumlama sonuçlarına göre hayvanların gebe kalma ve gebe kalmama durumu ile kan parametreleri arasındaki ilişkiler lojistik regresyonla incelenmiştir. Lojistik regresyon analizi sonucuna göre BHB değerinin negatif yönlü ve önemli (p=0,041) etkisinin olduğu tespit edilmiştir. İlk tohumlamada gebe kalan ve gebe kalmayan hayvanların kan değerlerinin varyans analizi sonuçlarına göre gebe kalan hayvanların (25.25 mg/dL) BUN değerinin gebe kalmayanlara (27.89 mg/dL) oranla önemli derecede (p=0.028) düşük oluğu, BHB değeri yönünden de gebe kalan hayvanların (0.272 mmol/L) gebe kalmayanlara (0.357) oranla önemli (p=0.041) düşük olduğu tespit edilmiştir.
|Dr. Engin Ünay|
|Halk Elinde Korunan Yerli Kara Sığırlarda Mikrosatelit Belirteçler Kullanılarak Genetik Çeşitlilik Anazlizi||2010||2011|| Bu araştırmada Ankara İli Çamlıdere ilçesi Osmansin köyünde yetiştirilen Yerli Kara sığır ırkına ait 136 baş dişi, 14 baş erkek olmak üzere toplam 150 baş ve Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsünde yetiştirilmekte olan Yerli Kara sığır ırkına ait 16 baş dişi, 7 baş erkek olmak üzere toplam 23 başlık sürüdeki hayvanlar kullanılacaktır.Bu hayvanların her birinden EDTA içeren tüplere 10 mL kan alınacak ve bu kanlardan DNA izolasyon kiti kullanılarak genomik DNA elde edilecektir. Elde edilen DNA'larda kırılma olup olmadığı agaroz jelde kontrol edilecek ve UV spektrofotometrede miktar ve saflık tayini yapılacaktır. Elde edilen DNA, PCR cihazında çoğaltılacaktır. PCR ürünleri genetik analizör cihazına yüklenerek her bir hayvanın profili çıkarılacaktır.Elde edilen fragment analizi sonuçları Yerli kara sığır ırkında gözlenen alleller, bu allellere ait allel frekansları ve heterozigotluk değerleri açısından GENETIX 4.05 analiz programı kullanılarak değerlendirilecektir. Ayrıca 2 ve 2'den fazla jenerasyon için kayıt bulunabildiği takdirde Hardy-Weinberg dengesinden sapma olup olmadığı Genepop 4.0 analiz programıyla değerlendirilecektir.||İlkay DEMİRHAN|
|Farklı Antioksidan ve Kriyoprotektanlar Katılmış Tris Sulandırıcısı ile Boğa Spermalarının Dondurulması ve İn Vivo Dğerlendirilmesi||2009||2011||Bu projede, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü Sun'i Tohumlama Laboratuvarında bulunan en az 2 yaşlı 3 baş Siyah Alaca (Holştayn) ırkı boğa kullanılacaktır. Boğalardan suni vajen yöntemiyle haftada 2 defa 2'şer ejakülat alınacaktır. Elde edilen ejakülatlarda bazı spermatolojik özellikler belirlenecektir. Boğadan alınan iki ejakülat birleştirilip, Tris ana solüsyonuyla sulandırıldıktan sonra 4 eşit hacme bölünecek ve içerisine kriyoprotektan olarak gliserol veya etilen glikol katılacaktır. İlk kısım % 5 oranında gliserol, ikinci kısım % 7 oranında gliserol, üçüncü kısım % 3 oranında etilen glikol ve dördüncü kısımda % 5 oranında etilen glikol içerecek şekilde hazırlanacaktır. Daha sonra her bir sulandırıcı 6 eşit kısma bölünerek her birinin içerisine farklı antioksidanlar katılacaktır (Kontrol grubu antioksidansız, 25 mM Trehaloz, 5 mM Sistein, 5 mM Sisteamin, 500 µg/ml Lycopen ve 25 mM Sükroz). Sulandırma işlemi sonrası ml de 60X106 spermatozoa olacaktır (her bir 0.25 ml 'lik payet içerisinde 15X106 spermatozoa bulunacaktır).|
Sulandırılan spermalar ekilibrasyonu takiben 0.25 ml'lik payetlere çekilerek, kontrollü dondurma cihazında dondurulacak ve sıvı azot içinde saklanacaktır. En az 24 saat sıvı azotta saklanan payetler çözdürülerek spermatolojik parametreler değerlendirilecektir.
Dondurulan payetlerde in vivo fertilite değerlendirmesi yapmak için, dondurma – çözdürme sonrası uygun olan sulandırıcılar damızlık ineklerin suni tohumlanmasında kullanılacaktır. Gebelik kontrolleri tohumlamadan sonraki otuzbeş ila altmışıncı günde rektal palpasyonla yapılacaktır.
|Dr. Pürhan Barbaros TUNCER|
|Vitrifiye Edilmiş Sığır Embriyolarında Direkt Transfer İmkanlarının Araştırılması||2008||2010||Bu projede, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü bünyesinde mevcut kültür ırkı sığırlarda süperovulasyon programı sonrası elde edilmiş, toplam 20 adet in vivo embriyo kullanılmıştır. Kontrol grubu olarak 10 adet iyi kaliteli in vivo embriyo taşıyıcı hayvanlara taze olarak nakledilmiş ve deneme grubunu oluşturan diğer 10 adet iyi kalite in vivo embriyo ise vitrifikasyon metodu ile dondurulup/çözündürülerek taşıyıcı hayvanlara nakledilmiştir. Embriyoların vitrifiye edilmesi amacıyla VS1 (0.1M Sakkaroz + 0.1M Ksiloz + %1 Polietilen Glikol + %10 Gliserol), VS2 (0.2M Sakkaroz + 0.2M Ksiloz + % 2 Polietilen Glikol + % 10 Gliserol + % 10 Etilen Glikol) ve VS3 ( 0.3M Sakkaroz + 0.3M Ksiloz + %3 Polietilen Glikol + %20 Gliserol + %20 Etilen Glikol) solusyonları kullanılmıştır (34). Çözündürmede, sıvı azottan çıkarılan payet 5-6 sn havada tutulup 200C'de suda tamamen çözündükten sonra sırasıyla 0.5M ve 0.25M Sakkaroz solusyonları içerisinde embriyolar devitrifiye (kriyoprotektanların uzaklaştırılması) edilmiş, %20 CS (buzağı serumlu) m-PBS (modifiye fosfat tampon solusyonu) içerisine alınmıştır. Çözündürülen in vivo embriyolar, kızgınlığı takip eden 7.günde taşıyıcılara ipsilateral olarak nakledilmiş ve gebelik oranlarına bakılmıştır. Gebelik kontrolleri nakil sonrası 60.günde rektal palpasyon ile gerçekleştirilmiş ve kayıt altına alınmıştır.|
Proje, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü bünyesinde TAGEM (Tarımsal Araştırmalar Genel Müdürlüğü ) desteğiyle yürütülmüştür.
|Muharrem SATILMIŞ|
|Vitrifiye sığır embriyolarından elde edilen gebelik oranlarının araştırılması||2007||2009|| ||DR. Numan AKYOL|
|Boğa Spermalarının Dondurulmasında Antioksidanların Etkisi||2007||2008||Bu projede, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü Sun'i Tohumlama laboratuarından sağlanan en az 2 yaşlı 3 baş Siyah Alaca (Holştayn) ırkı boğa kullanılacaktır. Boğalardan suni vajen yöntemiyle haftada 2 defa (Pazartesi ve Perşembe günleri) 2'şer ejakülat alınacaktır. Elde edilen toplam 20 ejakülatta bazı spermatolojik özellikler (sperma miktarı, rengi, pH'sı, mass aktivite, spermatozoa motilitesi, spermatozoa yoğunluğu, plasma membran bütünlüğü ve anormal spermatozoa oranı) belirlenecektir. Boğadan alınan iki ejakülat birleştirilip 5 eşit hacme bölünerek sistein (5, 10 mM) ve glutatyon (0.5, 2 mM) içeren ve içermeyen laiciphose sulandırıcısıyla ml de yaklaşık 60X106 spermatozoa olacak şekilde sulandırılacaktır.|
Sulandırılan spermalar ekilibrasyonu takiben 0.25 ml'lik payetlere çekilerek, kontrollü dondurma cihazında dondurulacak ve sıvı azotta saklanacaktır. En az 24 saat sıvı azotta saklanan payetler çözdürülerek spermatolojik parametreler değerlendirilecektir.
Dondurulan payetlerde in vivo fertilite değerlendirmesi yapmak için, her bir grup sulandırıcıyla dondurulan her bir boğaya ait payetler 40, toplamda 600 baş damızlık ineğin suni tohumlanmasında kullanılacaktır. Gebelik kontrolleri tohumlamadan sonraki otuzbeş ila altmışıncı günde rektal palpasyonla yapılacaktır.
|Dr. Pürhan Barbaros TUNCER|
|EMBRİYO TRNASFER TEKNİKLERİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE SAHADA YAYGINLAŞTIRILMASI||2007||2009||Bu proje ile sığır embriyolarının cinsiyetlerini ekonomik, kolay uygulanabilir ve hızlı sonuç veren, non elektroforetik PCR yöntemi ile tespit etmek ve bu işlemi rutin hale getirmek amaçlanmıştır.|
Önerilen proje kapsamında in vivo şartlarda yedi günlük sığır embriyoları uterus yıkaması yöntemiyle elde edilmiştir. Elde edilen embriyoların bir kısmı cinsiyet tayini yapılarak, bir kısmı da cinsiyet tayini yapılmadan vitrifiye edilerek dondurulmuştur.
Embriyoların vitrifiye edilmesi amacıyla VS1 (0,1M sakkaroz + 0,1M ksiloz + %1 polietilen glikol + %10 gliserol), VS2 (0,2M sakkaroz + 0,2M ksiloz + % 2 polietilen glikol + %10 gliserol + %10 etilen glikol) ve VS3 ( 0,3M sakkaroz + 0,3M ksiloz + %3 polietilen glikol + %20 gliserol + %20 etilen glikol) solüsyonları kullanılmıştır.
Çözündürmede, sıvı azottan çıkarılan payet 5-6 saniye havada tutulup 20oC'de suda tamamen çözündükten sonra sırasıyla 0,5M ve 0,25M sakkaroz solüsyonları içerisinde embriyolar devitrifiye (kriyoprotektanların uzaklaştırılması) edilerek, %20 buzağı serumlu PBS içerisine alınmıştır.
Cinsiyeti belirlenmiş embriyolar vitrifikasyon metoduyla dondurulmasının ardından 23 adet taşıyıcıya nakilleri yapılmıştır. Kontrol grubundaki embriyolarda vitrifikasyon metoduyla dondurulmasının ardından 21 adet taşıyıcıya nakilleri yapılmıştır. Taşıyıcıların gebelik kontrolleri 60. günde rektal palpasyon ile gerçekleştirilmiştir. Transferi yapılan embriyoların cinsiyetleri buzağı doğumlarının ardından kayıt altına alınmıştır.
Gebelik oranları cinsiyeti belirlenen embriyolarda %30,4 cinsiyet tayini yapılmayanlarda ise %42,9 olarak bulunmuştur. Yapılan nakiller sonucunda elde edilen gebelikler bakımından istatistikî olarak önemli bir farklılık yoktur.
|Tahir KARAŞAHİN|
|VİTRİFİYE SIĞIR EMBRİYOLARINDAN ELDE EDİLEN GEBELİK ORANLARININ ARAŞTIRILMASI ||2007||2009||Bu projede, 2007 yılı Mayıs ayında Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma|
Enstitüsü bünyesinde mevcut kültür ırkı sığırlarda süperovulasyon programı sonrası elde edilecek in vivo embriyolar kullanılacaktır. 7.günde uterus yıkamasıyla elde edilecek embriyolardan dondurulmaya uygun en az 30 adedi vitrifikasyona tabi tutulacaktır. Embriyoların vitrifiye edilmesi amacıyla VS1 (0.1M Sakkaroz + 0.1M Ksiloz + %1 Polietilen Glikol + %10 Gliserol), VS2 (0.2M Sakkaroz + 0.2M Ksiloz + % 2 Polietilen Glikol + % 10 Gliserol + % 10 Etilen Glikol) ve VS3 ( 0.3M Sakkaroz + 0.3M Ksiloz + %3 Polietilen Glikol + %20 Gliserol + %20 Etilen Glikol) solusyonları kullanılacaktır (25). Vitrifikasyon etkinliğinin araştırılması amacıyla uygun dönemler halinde çözündürme işlemi gerçekleştirilecek ve embriyoların in vitro canlılık değerlendirmeleri yapılacaktır.Çözündürmede, sıvı azottan çıkarılan payet 5-6 sn havada tutulup 20 0C'de suda tamamen çözündükten sonra sırasıyla 0.5M ve 0.25M Sakkaroz solusyonları içerisinde embriyolar devitrifiye (kriyoprotektanların uzaklaştırılması) edilerek, %20 buzağı serumlu m-PBS (modifiye tampon fosfat) içerisine alınacaktır.Çözündürülen embriyolar, kızgınlığı takibeden 7. günde taşıyıcılara nakledilerek gebelik oranlarına bakılacaktır. Gebelik kontrolleri 30. ve 60. günlerde USG ile 90. günde RP ile gerçekleştirilerek kayıt altına alınacaktır.
|Dr. Sedat Hamdi KIZIL|
|SIĞIRLARDA OVUM PICK-UP (OPU) TEKNİĞİ KULLANILARAK |
IN VITRO EMBRİYO ÜRETİMİ
|2005||2006||Üstün verim yeteneğine sahip sığırlardan birim zamanda alınan embriyo sayısını artırmak bu çalışmanın amacını teşkil etmektedir.|
Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsünde barındırılan, seksüel açıdan problem taşımayan, 2-5 yaşlı, 12 baş Siyah Alaca düve ve inek oosit vericisi (Donor) kullanılacaktır. Oosit toplama (ovum pick up-OPU) işi, özel bir proba sahip ultrasound cihazı yardımıyla ardışık olarak haftada bir kez olmak üzere bir düveden toplam 10x2 kez gerçekleştirilecektir. Bu yöntemle toplanan oositler laboratuvarda (in vitro) önce maturasyonları sağlanacak ardından da, üstün genotipik ve fenotipik özellikteki boğalara ait spermatozoonlar kullanılarak döllenecektir (in vitro fertilizasyon). İn vitro embriyo kültürünün ardından, elde edilen embriyoların taşıyıcı annelere taze olarak transferleri gerçekleştirilecektir.
Oositlerin maturasyonu amacıyla TCM-199 + %10 FCS + 2µg/ml FSH mediumu kullanılacak ve 22 saat süreyle %5CO2, %95'in üzerinde nem ve 39oC'deki inkubatörde maturasyon işlemi gerçekleştirilecektir. İn vitro fertilizasyon gayesiyle, Brackett ve Oliphant (BO) mediumu kullanılacak ve aynı inkubatör şartlarında 5-6 saat süreyle fertilizasyonları gerçekleştirilen embriyolar Charles Rosencrans (CR1aa) aminoasitli mediumunda kültüre alınacaklardır. Fertilizasyon sürecinin ardından 6 ve 7. günlerde iyi kalite embriyo haline gelenlerden taşıyıcı annelere transferler yapılarak Türkiye'de ilk kez OPU ve IVF yöntemiyle buzağılar elde edilecektir.
Embriyo Transferi teknolojisinde uygulanan süperovulasyon uygulamalarına kıyasla beş kat daha fazla sayıda yavru elde edilmesini sağlayan bu yöntemle, vasıfsız taşıyıcı anneler kullanarak kısa sürede genetik kapasitesi yüksek sürüler elde etmek mümkün olacaktır.
|Dr. Numan AKYOL|
|RUMİNANT BESLEMEDE KULLANILAN KABA YEMLERİN SİNDİRİLEBİLİRLİĞİNİN ARTIRILMASI AMACIYLA LAKTİK ASİT BAKTERİLERİNE FİBROLİTİK ÖZELLİK KAZANDIRILMASI: –ANAEROBİK FUNGUSLARIN KÜLTÜR KOLEKSİYONUNUN OLUŞTURULMASI||2005||2007||Rumenin ve tek mideli herbivorların sindirim sistemlerinde yaşayan ve şu ana kadar en iyi bilinen temel fonksiyonları hayvanlar tarafından alınan bitki parçacıklarını hazır enerji kaynaklarına dönüştürmek olan üç ana grup rumen mikroorganizmaları (bakteriler, funguslar ve parotozoanlar) ile birlikte yaşadıkları konakçı hayvanlar arasında simbiyotik bir yaşam söz konusudur. Bu ilişkide konakçı hayvan mikroorganizmalar için uygun yaşam ortamı sağlarken mikroorganizmalar da karşılığında hayvanlar tarafından alınan lifli kaba yemlerin hazır enerji kaynağı durumunda olan glikoz, ksiloz veya sellobiyoz gibi sakkaritlere çevrilmesini üstlenir. Rumen mikroorganizmalarının üstlenmiş oldukları bu görev sahip oldukları çeşitli ve oldukça aktif enzim sistemleri sayesinde gerçekleşmektedir. Sindirim sisteminin mikrobiyal ekosistemi içerisinde bu önemli görevi en aktif olarak yapan grup ise ilk defa 1975 yılında Orpin tarafından koyun rumeninden izole edilmiş olan anaerobik funguslardır. Özellikle, ekonomik değere sahip enzimleri kodlayan genlerin izolasyonu ve bu genlerin selülolitik ve hemiselülolitik özelliklere sahip olmayan laktik asit bakterilerine aktarılması günümüz bilim dünyasının üzerinde yoğunlaştığı bir araştırma alanı konumundadır. |
Bu proje kapsamında ilk aşamada anaerobik fungusların izolasyonu ve saflaştırılmaları gerçekleştirilecektir. Bu amaçla geniş bir coğrafik alandan, farklı bölgelerde ve farklı çiftliklerde barındırılan özellikle Yerli Kara ve Güney Anadolu Sarı-Kırmızısı ırkı sığırların dışkılarından fungal tarama yapılacaktır. Böylece özellikle entansif yetiştiriciliğe tabi olan ruminantların sindirim sistemlerinde geniş bir biyolojik çeşitliliğe sahip oldukları öngörülen anaerobik fungusların gen kaynaklarını korumaya yönelik olarak kültür koleksiyonu oluşturulacaktır. Kültür koleksiyonunun oluşturulmasını takiben bu fungusların sahip oldukları yüksek aktivite gösteren fibrolitik enzimleri tayin edilecektir. Bu enzimleri kodlayan genler laktik asit bakterilerine aktarılacak ve böylece laktik asit bakterilerine fibrolitik özellik kazandırılacaktır. Bu bakteriler silajlarda inokülant olarak kullanılacak ve böylece bu yemlerin sindirilebilme oranları artırılacaktır. Bu yemlerin sindirilebilme dereceleri in vitro NDF sindirilebilirliği ile belirlenecektir.
|Dr. Sema YAMAN|
|Orta Anadolu Şartlarına Uygun Sakızxakkaraman G1 Ve Kıvırcık X Akkaraman G1 Genotiplerinin Geliştirilmesi||2003||2006||1995 yılında TİGEM' e bağlı Sivas-Ulaş Tarım İşletmesi'nde Ankara Üniversitesi Araştırma Fonu tarafından desteklenen bir proje ile Sakız x Akkaraman ve Kıvırcık Akkaraman melezleme çalışmaları başlatılmıştır. Melezleme çalışmaları 1996 yılında da yürütülmüştür. Böylece 1996 ve 1997 yıllarında Sakız x Akkaraman F1 ve Kıvırcık x Akkaraman F1 melezler elde edilmiştir. Daha sonra TAGEM tarafından desteklenen bir proje ile 1997 yılında 20 baş Akkaraman, 81 baş Sakız x Akkaraman F1 ve 47 baş Kıvırcık x Akkaraman F1 melez koyun ve kuzular Lalahan Hayvancılık Araştırma Enstitüsü'ne getirilmiştir. Enstitüde 1997 – 2002 yılları arasında yürütülen çalışmalarla Akkaraman, Sakız x Akkaraman F1 ve G1 ile Kıvırcık x Akkaraman F1 ve G1 koyunlarda yaşama gücü, yapağı, döl ve süt verimi; Akkaraman, Sakız x Akkaraman F2 ve G1 ile Kıvırcık x Akkaraman F2 ve G1 kuzularda yaşama gücü, büyüme, besi performansı, kesim ve karkas özellikleri belirlenmiştir. Bu çalışmalar sonunda melezleme çalışmalarının devam ettirilmesi gerektiği sonucuna ulaşılmıştır. Melezleme çalışmalarına G1 düzeyinde son verilmiş ve Sakız x Akkaraman G1 ve Kıvırcık x Akkaraman G1 genotipleri kendi içinde yetiştirilmeye başlanmıştır. Böylece Orta Anadolu şartlarına uygun yeni iki koyun tipinin elde edilmesi çalışmalarına devam edilmektedir. |
Bu proje kapsamında Akkaraman, Sakız x Akkaraman G1 ve Kıvırcık x Akkaraman G1 koyunlarda çeşitli verim özellikleri ve kuzularda büyüme ve yaşama gücü incelenecektir.
|Dr. Melik AYTAÇ|
|İNEKLERDE SÜPEROVULASYON|
ARALIĞININ KISALTILMASI ELDE EDİLEN EMBRİYO SAYI VE KALİTESİNİN ARTIRILMASI
|2002||2005||Bu proje, Tarımsal Araştırmalar Genel Müdürlüğünün desteği ile|
Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü'nde yürütülmüştür. Ülkemizde ilk kez süperovulatör hormon olarak FSH (Folltropin-V) ve Progesteron (PRID) kombinasyonu kullanılmıştır. Süperovulasyon ve uterus yıkamalarının ardışık bir şekilde gerçekleştirilerek, birim zamanda kaliteli ve daha fazla sayıda embriyo alınmasını hedeflenmiştir. Gerek süperovulasyona cevapların düşük kalması gerekse kaliteli embriyo sayısında istenilen düzeyde sonuç alınamaması gibi sonuçları olsa da, teknik eleman eğitimine olan katkısı ve embriyo transfer teknolojisi ile ilgili tecrübelerimizin artırılmasına yaptığı katkıyı yabana atmamak gerekir. Çeşitli MOET projelerinin hayata geçirildiği ülkemizde birim zamanda alınan embriyo sayı ve kalitesini artırmaya yönelik çalışmaların devam etmesinde fayda bulunmaktadır zira mevcut teknik altyapı ve yetişmiş eleman sayısı MOET projelerinin gerektirdiği ET ile ilgili sonuçlara optimum zamanda ulaşılmasını mümkün kılmamaktadır. Bu amaçla hem saha şartlarında uygulanabilir bir embriyo transferi tekniği için imkanların genişletilmesi hem de tecrübe eksiklerinin giderilmesi yararlı olacaktır
|Dr.Numan AKYOL|
|YEDİ GÜNLÜK İNEK EMBRİYOLARININ|
VİTRİFİKASYONLA DONDURULMASI
|2002||2005||Bu çalışmanın amacı; in-vitro olarak üretilen sığır embriyolarının, uygulaması kolay ve fazla maliyet gerektirmeyen vitrifikasyon metodu ile dondurulma başarısının incelenmesidir. Çözündürmede, sıvı azottan çıkarılan payet 5-6 sn havada tutulup 20 0C'de suda tamamen çözündükten sonra sırasıyla 0.5M ve 0.25M Sakkaroz solusyonları içerisinde embriyolar devitrifiye (kriyoprotektanların uzaklaştırılması) edilerek, % 20 buzağı serumlu m-PBS (modifiye tampon fosfat) içerisine alınmıştır. Embriyolar canlılıklarının incelenmesi amacıyla; TCM-199 + 0,1mM β-Merkaptoetanol + % 20 Buzağı serumu (CS) içeren mediuma alınarak, % 5 CO2 , %99 bağıl nem ve 38,5 0C 'deki inkubatörde 24-48 saat inkubasyona tabi tutulmuştur. |
Çözüm sonrası PBS'e alınan 100 embriyoların, 85'inin intakt ooplazmalı olduğu görülmüştür. Blastosistlerin re-ekspansiyon ve hatch olma oranı %35 bulunmuştur.Buna göre in vitro üretimi embriyoların vitrifikasyonla dondurulup çözündürüldüklerinde %35 canlılık gösterdikleri tespit edilmiştir.
İn vitro üretimi embriyoların vitrifikasyon metodu kullanılarak kolaylıkla dondurulabileceği ve bu yöntemin tatminkar düzeyde canlılık sağladığı görülmüştür.
Mezbahada kesilen sığırların ovaryumlarından elde edilen 100 adet in-vitro üretimi iyi kalite kompakt morula ve blastosit safhasındaki sığır embriyosu, kültürlerinin yedinci gününde vitrifikasyon metodu ile dondurulmuştur.
|Dr. S. Hamdi KIZIL|
|TÜRKİYE'DE YETİŞTİRİLEN YERLİ VE KÜLTÜR IRKI SIĞIRLARDA BAZI BİYOKİMYASAL KAN PARAMETRELERİ||1998||2002||Yerli kara, Boz ırk, Güney Anadolu Kırmızısı (GAK), Doğu Anadolu Kırmızısı (DAK), Holştayn, Simental, Esmer ve Jersey olmak üzere Türkiye'nin çeşitli bölgelerindeki Tarım İşletmelerinde veya özel çiftliklerde yetiştirilen sekiz ırktan dört mevsim toplam 119 kan örneği alınmıştır. Kan serum örneklerinde glikoz, ALT, AST, ALP, LDH, GGT, CK, Kolesterol, Trigliserit, T.Protein, T.Bilirubin ve Kreatinin tayinleri ve serum proteinlerinin SDS-Poliakrilamid Jel Elektrofezleri yapılmıştır. Elde edilen ortalama değerler açısından ırklararası ve aynı ırkların mevsimlerarası farklılıklar istatistik olarak iki faktörlü varyans analizi ile karşılaştırılmış ve farkların önemlilikleri Duncan testi ile değerlendirilmiştir. Irklararası ve mevsimlerarası önemli farklılıkların varlığı ortaya konmuştur.|
Bazı serum parametre değerleri bazı mevsimlerde tamamlanamadığı için sağlıklı bir istatistiki karşılaştırma yapılamamıştır.
Sonuç olarak en yüksek serum glikoz değerlerine yazın Yerlikara'larda, en düşük değerlere ise sonbaharda Esmer ve DAK sığırlarda rastlanmıştır.
Serum kolesterol değerleri açısından ilkbahar ve kış mevsimlerinde ırklar arası önemli önemli farklılıklar (P<0.01) saptanmıştır. En yüksek serum kolesterol değerlerine Holştayn'larda rastlanmıştır. En düşük değerler ise mevsimlere ve ırklara göre değerlendirilmiştir.
Serum toplam protein değerlerinin mevsimsel ve ırksal farklılıklar sergilediği saptanmıştır.
Serum trigliseridlerinin incelenen üç mevsimde (yaz, sonbahar, kış) yerlikara ve GAK hariç diğer ırklar arasında önemli farklılıklar saptanamamıştır. En yüksek değerlere sonbahar; en düşük değerlere ise kış mevsiminde rastlanmıştır.
Simental ırkı sığırlarda serum kreatinin değerleri açısından mevsimler arası farkın önemli olmadığı diğer ırklarda mevsimsel farklılıkların varlığı gözlenmiştir.
Serum T.bilirubin ortalama değerleri açısından ilkbahar ve kış mevsimleri arasında önemli farklılıklar dikkat çekici bulunmuştur.
Serum enzim düzeyleri (ALT, AST, GGT, ALP, LDH ve CK) ırklar arasında mevsimsel farklılıklar sergilemiştir. Ancak hiçbirisi patolojik kabul edilebilecek anormal değerlere (Karagül ve Ark, 2000) ulaşmamıştır.
Serum proteinlerinin SDS-PAGE ile incelenmesinde molekül ağırlıklarına göre proteinlerin % dağılımlarının ırklar arasında mevsimlere göre farklılıklar sergilediği gözlenmiştir.
|Melik AYTAÇ|
|Türkiye' de Farklı İklim ve Beslenme|
Koşullarında Yetiştirilen İthal ve Melezi Sütçü Sığır Irklarının Çevre Şartlarına, Hastalıklara Karşı Dayanıklılığı ve Genetik Özelliklerinde Şekillenebilecek Değişikliklerin Tespiti İçin Hormon, Protein, Enzim ve İzoenzimlerinin Araştırılması
|1998||2002|| ||Melik AYTAÇ|
|Kültür Ortamına Katılan Bazı Antioksidan Maddelerin İn Vitro Embriyo ve Gelişim ve Dondurma Üzerine Etkileri|| ||2011|| ||Tahir KARAŞAHİN|
|Halk elinde korunan yerli kara |
siğirlarda biyoçeşitlilik analizi
| || ||Ankara İli Çamlıdere ilçesi ve Çankırı ili Bayramören ilçesinde Yerli Genetik Kaynakları Halk Elinde Koruma Projesi kapsamında yetiştirilen Yerli Kara sığır ırkına ait toplam 200 baş Yerli Kara sığır projenin hayvan materyalini oluşturmuştur. EDTA içeren tüplere alınan 10 mL kandan izolasyon kiti kullanılarak DNA izole edilmiş, elde edilen DNAlarda UV spektrofotometrede miktar ve saflık tayini yapılarak sığırlarda ebeveyn testinde kullanılmak üzere ISAG tarafından tavsiye edilen 11 bölgeye ait mikrosatellit işaretçiyi mültipleks olarak genotiplendiren Applied Biosystems firması tarafından üretilen StockMarks Bovine kiti ile PCR reaksiyonları gerçekleştirilmiştir. Kapiller elektroforez cihazına yüklenen örneklerin genotipleri elde edildikten sonra kodlanarak popülasyon genetiği hesaplamaları gerçekleştirilmiştir.|
Yapılan popülasyon genetiği hesaplamaları sonucu incelenen Yerli Kara sığır popülasyonunun genetik çeşitliliğini koruduğu ve HW açısından dengede olduğu görülmektedir. Akrabalığın artması ya da heterozigotluk kaybı gibi olumsuz etkilere rastlanmamıştır.
|Vedat KARAKAŞ |
|Süt ve üreme ile ilişkilendirilmiş |
bazı snplerin iki farklı sığır ırkı için değerlendirilmesi
| || ||Bu çalışma, üreme ve süt verimleri açısından birbirinden farklı iki ırk olan Siyah Alaca (Holstein) ve Yerli Kara sığır ırklarını, süt ve üreme ile ilgili fizyolojik yolaklarda görev alan bazı genlerde bulunan ve bir kısmı daha önceki çalışmalarda çeşitli üreme ve süt verim özellikleri ile ilişkilendirilmiş 58 SNP içeren bir panelle genotiplendirip allel ve genotip frekansları açısından karşılaştırmak amacıyla yapılmıştır. |
Çalışmada hayvan materyali olarak, 75 baş Yerli Kara ve 75 baş Siyah Alaca sığırı kullanılmıştır. Örnekler tesadüfi olarak seçilmiş, DNA izolasyonu ve genotiplendirme çalışmaları için kan alınmıştır. Kasp™ ticari adıyla bilinen allel spesifik oligo hibridizasyonu yöntemiyle çalışan genotiplendirme yöntemi kullanılmış ve elde edilen veriler değerlendirildiğinde 31 lokus polimorfik bulunmuştur. Bu 31 lokusun genotip ve allel frekansları Kikare testi ile karşılaştırılmış, 21 lokus allel frekansları açısından (α=0,01; df=1; χ2=6,635), 17 lokus genotip frekansları açısından (α=0,01; df=2; χ2=9,210), farklı bulunmuştur. Sonuç olarak, seçilen genlerin ve bu genler üzerindeki SNPlerin, süt ve üreme parametreleri açısından sığırlarda varyasyon kaynağı olabileceğine dair önceki çalışmalarda elde edilen sonuçları destekleyici veriler elde edilmiştir.
|Vedat KARAKAŞ |
|Yerli evcil hayvan gen bankasi ve sürdürülebilir kullanimi: |
doğu anadolu kirmizisi ineklerde epidural yolla yapilan
süperovulasyon etkinliğinin araştirilmasi
| || ||Çalışmada, Türkiye Yerli Evcil Hayvan Genetik Kaynaklarından Bazılarının In Vitro Korunması ve Ön Moleküler Tanımlanması-I (TÜRKHAYGEN – I) projesi kapsamında Kurumumuzda kurulan gen bankasında yetersiz sayıda olan Doğu Anadolu Kırmızısı (DAK) sığır ırkına ait embriyo elde edilmesi ve gen bankasına altyapısının güçlendirilmesi ile sürdürülebilir kullanımının sağlanması amaçlanmıştır. Projede kurumumuza TÜRKHAYGEN – I projesi bitiminden sonra devredilmiş ve kesime gidecek 8 baş DAK sığırı 2 gruba ayrılarak iki farklı süperovulasyon programı uygulanmıştır. Uygulama 3 replikasyon şeklinde yapılmıştır. Her replikasyondan sonra hayvanlar değiştirilerek aynı uygulamanın 2 defa üst üste aynı guruplarda uygulama yapılması önlenmiştir. Süperovulayonlar amacıyla epidural+im yolla tek seferde ve 12 saat arayla azalan dozlarda 4 gün boyunca FSH uygulaması şeklinde iki yöntem uygulandı. Uterus yıkamaları cerrahi olmayan yöntemle yapıldı. Proje kapsamında toplamda 32 adet DAK sığırında uterus yıkamaları yapıldı. Elde edilen iyi kalite embriyolar vitrifikasyon tekniği ile dondurularak kurumuz bünyesinde bulunan gen bankasına eklenmiştir.||Muharrem SATILMIŞ|
|Sığırlarda görülen bazı kalıtsal bozuklukların |
tespitinde multipleks pcr optimizasyon
imkanlarının araştırılması
| || ||Yetistirme programlarında kalıtsal çekinik kusurların kontrol edilmesi ve popülasyondan eradike edilmesi için fenotipik olarak normal görünen taşıyıcı bireylerin belirlenerek sürüden uzaklaştırılması çok önemlidir. Bu amaçla genetik hastalıkların teşhisine yönelik yüksek güvenilirlikte analiz metotlarının geliştirilmesi önem kazanmıştır.|
Sığır lökosit adezyon eksikliği (BLAD), uridin monofosfat sentaz eksikliği (DUMPS), kompleks vertebral malformasyon (CVM), sığır sitrullinemi (BC), faktör XI eksikliği (FXID) ve Brachyspina (BY) otozomal resesif kalıtsal hastalıklardır ve sığır yetiştiriciliğinde dünya çapında önemli ekonomik zararlara neden olur.
Çalışmanın amacı sığırlarda görülen BLAD, CVM, BC, DUMPS, BY ve FXID genetik hastalıklarının teşhisine yönelik multipleks PCR optimizasyonunun araştırılmasıdır. Bu amaçla mutant allellerin tespitine yönelik olarak moleküler metotlardan PCR, PCR-RFLP, RT-PCR analiz yöntemleri kullanılmış ve Uluslararası Hayvancılık Araştırma ve Eğitim Merkezi bünyesinde yetiştirilen 24 baş damızlık boğa hastalıklar yönünden analiz edilmiş ve mutant alelle rastlanmamıştır. RT-PCR metodu ile DUMPS, BLAD, BC ve CVM mutant allellerinin teşhisine yönelik analiz metodu geliştirilmiş, genomda mutasyon bölgelerinin polimorfik yapısı nedeniyle multipleks olarak çalışılamamıştır, ancak tek plate de farklı reaksiyon karışımı ile aynı anda BLAD, CVM, DUMPS ve BC genotiplendirmesi yapılmıştır. Bu metotla analiz süresi kısalmış ve yüksek güvenilirlikte sonuç elde edilmiştir.
|Zeynep Semen|
|Yetiştirici ve enstitü koşullarındaki yerli kara sığırların bazı morfolojik ve verim özelliklerinin belirlenmesi|| || ||Yürütülen çalışmada, genetik kaynak olarak korunan Yerli Kara sığırların bazı özelliklerinin belirlenmesi, yerinde ve Enstitü şartlarında korumanın bu verilerdeki farklılıklarının ortaya konulması hedeflenmiştir.|
Araştırmanın hayvan materyalini Ankara ili Çamlıdere ilçesi Osmansin köyünde bulunan Yerli Kara Sığırı Yerinde Koruma Projesi kapsamındaki yetiştiricilere ait 100 baş Yerli Kara Sığırı ve Enstitüde mevcut bulunan Yerli Kara Koruma Sürüsü oluşturmuştur.
Doğum ağırlığı, 3. , 6. , ay canlı ağırlıkları, cidago yüksekliği, sağrı yüksekliği, vücut uzunluğu, ön incik çevresi, baş genişliği, göğüs çevresi, göğüs derinliği ve yüz uzunluğu ölçüleri alınmıştır.
Örneklenen ineklerde laktasyon başlangıcı, ortası ve sonu olmak üzere 3 kez kan alınmıştır. Kanlar vena jugularisten normal tüpe alınarak santrifüj edilip serumları çıkarılarak Glikoz, Üre, İnsülin, Nefa, Total Kolesterol değerleri otoanalizör (Randox, Rx, Monaco, USA) yardımı ile yapılmıştır.
Yetiştirici koşullarındaki sürülerin otladığı meralardan ot örnekleri alınarak kimyasal analizleri yapılmıştır. Aynı bölgeden meteorolojik veriler seyyar istasyon yardımı ile alınmıştır. Hayvanlara takılan kulak sensörü yardımı ile günlük aktiviteleri kaydedilmiştir.
Elde edilen verilerin değerlendirilmesinde Enstitü şartlarında korumanın bazı vücut ölçüleri ve canlı ağırlığı değiştirdiği görülmüştür. Özellikle sağrı genişliği ve göğüs derinliğinde gözlenen daralmanın genetik karşılığı olup olmadığının incelenmesi gerektiği düşünülmektedir. Enstitü koruma sürüsünün büyük kısmının yetiştirici bölgesinden geldiği göz önüne alındığında bu değişimin önemli olabileceği ve polimorfizm oluşması durumunda ise ırkın doğal üstünlüklerinin değişebileceği düşünülmektedir.
|Dr. Engin Ünay|
|SIĞIRLARDA EMBRİYO|
TRANSFERİ ÇALIŞMALARI
| || ||Bu çalışmada; embriyo transferinin enstitü şartlarında uygulaması yapılmış ve elde edilen embriyoların taze ve dondurulduktan sonraki nakil sonuçlarına bakılmıştır. Donor olarak kullanılan 12 baş Siyah Alaca ve Esmer inek ve düveden yapılan 22 uterus yıkaması sonucu 75 embriyo ve ovum bulunmuş; bunların 20 (%26.6) adedi iyi kalite, 10 (%13.3) adedi vasat, 4 (%5.3) adedi zayıf, 25 (%33.3) adedi dejenere ve 16 (%21.3) adedi fertilize olmamış ovum olarak tespit edilmiştir. Bunlardan dondurulmaya uygun olan 15 adedi % 10 Gliserollü aşamalı klasik metoda göre dondurularak, 9 adet nakil gerçekleştirilmiştir. Dondurulmuş/çözündürülmüş embriyo nakillerinden gebelik elde edilememiştir. Taze olarak nakli yapılan 10 adet embriyodan 7 (%70) adet gebelik sağlanmıştır||Numan AKYOL|
|ETİLEN GLİKOL İLE DİREKT TRANSFER METODUNA GÖRE DONDURULAN İNEK EMBRİYOLARINDAN ELDE EDİLEN GEBELİK ORANLARININ ARAŞTIRILMASI|| || ||Bu çalışmanın amacı; Etilen glikol direkt transfer metoduna göre dondurulan in-vivo inek embriyolarının, çözündürüldükten sonra, taşıyıcı hayvanlara nakledilerek gebelik elde edilmesidir.|
Projenin ilk aşamasında; 56 adet iyi kalite in vitro üretim inek embriyosu etilen glikol direkt transfer metoduna göre dondurulmuştur. Çözündürme sonrası TCM-199 + 0,1mM β-Merkaptoetanol + %10Buzağı serumu (FCS) içeren solüsyon içerisinde, 24-48 saat inkubasyonda, 36 adet embriyonun re-ekspansiyonu ve zonadan çıkmış olduğu görülmüştür. Canlılık oranı %64.28 olarak tespit edilmiştir. İkinci aşamada; süperovule edilen kültür ırkı ineklerden 8 adet embriyo izole edilmiştir. Embriyolar ısı ile inaktive edilmiş, %20 buzağı serumlu D-PBS içerisindeki 1.8M Etilen glikol + 0.1M sakkaroz solüsyonu ile birlikte 0.25ml'lik steril payetlere çekilmiştir. Yerleştirme her bir payete bir embriyo olacak şekilde yapılmış ve payetler oda sıcaklığında 15 dakika ekilibre edilmiştir. Programlanabilir dondurma cihazının metil alkol bulunan haznesi içerisine payetler yerleştirilerek, -7oC'den itibaren soğutma işlemine başlanmıştır. Bu derecede 2 dakika sonra payetlere seeding yapılmış ve 8 dakika daha aynı ısıda bekletilmiştir. Soğutma işlemine -30oC'ye kadar -0.3oC/dk olacak şekilde devam edilmiş ve direkt -196oC'de sıvı azot içerisine alınarak embriyolar muhafaza edilmiştir. Çözündürmede, sıvı azot içerisinden alınan payet önce 5-6 sn havada tutulmuş, 30oC'deki su banyosu içerisinde 10sn'de tamamen çözünmesi beklenmiştir. Önceden prostaglandin F2α ile sinkronize edilen 8 adet taşıyıcı ineğe kızgınlığının yedinci gününde, rektal palpasyon ile CL tespiti yapılmıştır. CL tespit edilen taşıyıcılara, kriyoprotektan uzaklaştırılmadan ve cerrahi olmayan yöntemle, ipsilateral olarak nakledilmiştir. Nakil sonrası 60. günde taşıyıcı hayvanların rektal palpasyon ile yapılan gebelik kontrollerinde 5 taşıyıcı hayvanın gebe olduğu tespit edilmiştir. Gebelik oranı %62.5 olarak bulunmuştur. Bu çalışmada kriyoprotektan olarak Etilen glikol'ün sığır embriyolarının dondurulması ve saha şartlarında direkt transferinde, suni tohumlama kolaylığında etkili olarak kullanılabileceği tespit edilmiştir.
|Dr. S. Hamdi KIZIL|