Spor Boyama
Sporların hücre çeperi çok kalın olduğu için alttan ısıtılmak suretiyle boyayı almaktadır. Gram boyama yönteminde sporlar boyasız, vegetatif şekiller boyalı görülür.Sporun boyanması için spor boyama yöntemi olarak en başta Schaffer Fulton yöntemi kullanılır.Bu yöntemde preparat malaşit yeşili ile alttan ısıtılarak 5 dk boyanır. Soğutulduktan sonra yıkanır.Dekolarizasyon yapılmadan kontrast boya olarak safranille 20 saniye boyanır.İmmersiyon objektifle incelenir. Sporlar yeşil, bakteri kırmızı, pembe görülür.Materyal:
• Lam
• Öze
• Besiyerinde bakteri kültürü
• Boya çözeltileri: malachit yeşili, safranin
• %95’lik etil alkol
• Kurutma kağıdı
• İmmersiyon yağı
• Mikroskop (100X obj.)
Metot:
Ø Temiz bir lam üzerine öze ile bir damla steril fizyolojik tuz çözeltisi damlatılır.
Ø Öze bunzen alevinde sterilize edilir,soğuması için kısa süre beklenir.
Ø Steril öze ile katı besiyerinden bir miktar kültür alınır.
Ø Kültür lam üzerine damlatılmış su ile karıştırılır.
Ø Öze bunzen alevinde sterilize edilip,yerine konur.
Ø Preparatın kuruması için bir süre beklenir.
Ø İyi bir tespit için pens yardımıyla ucundan tutulan lam bunzen aleviden 20 kere geçirilir.
Ø Preparatın üzeri kurutma kağıdı ile kaplanır, üzerine malachit yeşili çözeltisi dökülür.
Ø Preparat hafif alev üzerinde veya su banyosunda 5 dakika ısıtılır. Ancak preparatın kurutulmamasına dikkat edilmelidir. Gerektiğinde üzerine boya ilave edilir.
Ø Preparat yavaş bir şekilde musluk suyu ile 10 saniye yıkanır.
Ø Karşıt boyama için safranin ile 15 saniye boyanır.
Ø Su ile yıkanır, kurutma kağıdı ile kurutulur.
Ø Yağ damlatılarak 100X objektif ile incelenir.