بسم الله الرحمن الرحيم راح ناخد مع بعض اليوم ان
شاء الله أول موضوع في معاملنا الفعلية في مادة الدم
السريري العملية راح تكون هي عبارة عن making blood
smear and examination of blood smear يعني كيف بدي
أعمل blood smear أو كيف بدي أقرأها وإيش الأشياء
اللي بعرفها من خلال blood smear بداية ماهي ال
blood smear؟الـ Blood Smear أنا باخد فيها ببساطة
drop من الـ blood و بجيب slide بفرض عليها ال drop
هذه بحيث أن ال blood يكون one layer يعني طبقة
واحدة من الخلايا هذا الشرط الأول الشغل التاني أن
تكون الخلايا هذه متجانسة من ناحية التوزيع بحيث أن
أي منطقة في هذه السمير تكون معبرة عن الكلإذا الـ
Blood Smear لازم تكون Monolayer بحيث أنه أقدر أشوف
الخلايا لو كانت الخلايا فوق بعض مش هقدر أميزها من
بعض الشغل التاني أن يكون الـ Distribution تبعها في
كل السمير متجانس طبيعي طيب نيجي أول طريقة اللي هي
الـ Cover Glass Smear هذا الطريقة وإن كانت طريقة
تعطي Distribution جيد وممتاز للخلايالكن مشكلتها أن
الـ Cover Glass يا بنات كتير صغيرة صعب أني أتعامل
معها صعب أني أسبغها صعب أني أخزنها صعب أني أعمل
لها label لـ Cover نفسها يعني هنا بفرض على الـ
Cover نفسها بينما الطريقة اللي بتعتمد على ال slide
slide to slide method اللي أنتوا تعلمتوها بيسميها
Wedge Smear إيش يعني Wedge Smear؟اللي هي إني
أستخدم Two Slides وأعمل الـ Smear من خلالهم هذا
الطريقة هي الأكثر شيوعا وإن كان إلها بعض الـ
disadvantages حناخدها في وقتها لكن هي المستخدمة
تقريبا على مستوى العالم الطريقة التالتة اللي هي
The Spun SmearSmall Smear هذه بتعتمد على وجود جهاز
بيقوم بفرد الخلايا طبقة واحدة و ال distribution
تبعها كتير كويس وهي هذه أفضل طريقة في الطرق
المتبعة كل ياتها أنه أستخدم الجهاز اللي بيعمل فرد
للشريحة لوحده وبيعطيني الخلايا موزعة بشكل جيدطبعاً
الـ Blood Smear العادية هذه اللي أنا بعملها بتكون
من الـ Holy Blood باخد عينة متجانسة و بفرضها و
بشتغل عليها أحياناً بضطر أني أعمل Blood Smear بطرق
خاصة أو يكون محتوها شوية مختلف عشان دراسة أشياء
معينة زي مثلا حاجة بسموها Buffy Cotesmearعارفين
إيش هو الـ Puffy Coat؟ الـ Puffy Coat إنه لما بعمل
centrifuge للبلد تطلع طبقة فوق ال RBCs الطبقة هذه
مكوّنة من ال white BCs and بلايلتز ال Puffy Coat
Smear هذه بتلزم أعمل .. يعني باخد ال drop منها و
بفرد بدل ما أخد من ال whole blood من الدم كله و
أفرد باخد بس من ال Puffy Coatهذه تلزم لما يبقى عدد
الـ «white blood cells» كثير قليل أقل من 1000 خلية
per µL ممكن أضطر أعمل الـ «buffing of smear» على
أساس أني أزود فرصة أني أشوف «white blood cells»
وبالتالي أقدر أعمل differential في عندي نوع تاني
بيسموه «thick blood film» طبعا احنا الفيلم العادي
اللي بنعمله عبارة عن «thin blood film» لأني أنا
لوحتيلكم بالبداية لازم الخلايا تكون مكونة من one
layer يعني هو «thin»الثمن أحيانًا بضطر إليه عشان
أعمل دراسة لبعض الـ Blood Parasites زي الملاريا،
يعني عندنا مثلًا الملاريا بتعيش في قلب الـRBCs، في
داخل الـRBCs فبتالي عشان أنا أشوف نيجي إيه
للـWedge Smear أو الطريقة التقليدية للـBlood Film
طبعًا أنا باخد Specimen عبارة عن Edith Blood أو
ممكن ناخد Micro Sample، عادي، بيمشي الحالطبعاً هنا
بقولك الـ Editable خلال ساعتين أو تلت ساعات من الـ
Collection يفضل ليش؟ لأنه بعد هيك ممكن يصير بعض
التغير في أشكال الخلايا نتيجة الـ Editable نفسها
يعني بتعمل ممكن تعمل shrinking للخلايا أو تعمل
damage لل shape تبعهازي اللي هو هيوش هنلاحظ هنا
بقولك إنه مع الوقت ممكن بعض الخلايا تصير
speculated أو مقارقة هي زي مكرمشة في بعض الحالات
إذا كانت كمية الـ Anticoagulant زيادة يعني إحنا
متفقين يا بنات إنه لما بسحب blood بسحب لغاية
العلامة طبعا هو هذه العلامة هم مابيكونوش حاطينها
عشوائي بيكونوا حاطينها بناء على إن كمية الـ Edita
أو الـ Anticoagulant أي إن كان تكون متناسبة مع
كمية الـ blood الموجودة أو اللي أنا بدي أضيفها على
العينة الشغلة التانية ممكن تعطيني adrenated cells
خلايا مش طبيعية all the blood أو long-standing لو
كان العينة قديمة أو طولت قبل ما أفردها ممكن تعطيكي
speculated cells لو كان الجو حار ممكن يشجع هذه
التغيرات اللي هي وجود ال adrenationالخلايا طبعا
الطريقة أنا هرفق لكم فيديو بيوضح الطريقة هذه
الطريقة أنه أنا باخد drop من ال blood على ال slide
و باجي ب angle 30 إلى 40 درجة عادي هورجيكم الحركة
و برجع ال slide شوية بعدين بسحب طبعا هنا الطريقة
يعنيفي الصور هيا هنا أوضح أول حاجة باخد drop من ال
blood ال drop باجي على ال slide التانية اللي تحت
بسميها slide اللي بعمل عليها الفيلم اللي فوق
بسميها spreader اللي بدي أفرد فيها باجي على ال
spreader بحطها قدام ال blood drop و باجي برجع شوية
صغيرة لغاية ما تفرد بس ما بديها توصل للأطراف على
الآخر لأ يعني تفرد توصل يظل شوية من الطرف هذا و
شوية من الطرف هذالأنه يا بنات لو وصلت للأطراف
احتكاط أطراف الـ slide هذه بالـ Spreader هيعمل
تكسير للخلايا فبالتالي الخلايا اللي بتكون على
الأطراف لو وصلت للأطراف هتبقى مشوهة عشان هيك بسيب
شوية ما بخليهاش لما تفرد تطلع معايا خليهاش لما
تفرد توصل للنهاية و بعدين بسحب إيدي بالحركة هذه
ضروري تشوفوا الفيديو المرفق عشان تتذكروا كيف طريقة
سرد الـ bloodبالنهاية بيطلع معايا سمير شكلها
bullet shape هي شكلها شكل الرصاصة يعني هذا أفضل
شكل لل blood طيب إيش هي مميزات ال good blood سمير
أول واحد أول حاجة أكيد المكان اللي أنا حاطيت عنده
ال drop هيبقى thick وبعد هيك هيبدأالـ blood يصير
thinner لغاية ما أوصل للنهاية بالنهاية بوصل ل
smooth rounded feather edge يعني في النهاية هوصل
لطرف الـ blood film هيكون rounded و هيكون smooth
فهذه المنطقة اللي عند النهاية اللي بتكون smooth
اللي هي التالتة على الفيلم هي أفضل منطقة لل count
لأن الخلايا بتكون فيها مكونة mono layerشغلة تانية
الـ Blood Film المفروض يشغل تلتين الـ Slide Area
تلتين المساحة الكلية بتاعة الشريحة برضه شغلة مهمة
«Don't touch any edge of the slide» يفترض زي ما
قلتلكم مايلمسش أطراف الـ Slide لأنه لو لمس ممكن
يصير تشوه أو تكسير للخلايا نتيجة احتكاك أطراف الـ
Slides ببعدshot be margin free except for the
point application يعني هلقيت لما باجي بتطلع على
الفيلم المفروض مايكونش فيه أي تعرشات أي تضاريس أي
حاجة بازة أو طالعة أو نازلة لازم كله يبقى smooth
واحد صح ال thickness مختلف لكن هو بيبقى smooth إلا
في مكان ما أنا حطيت العينة مكان ما حطيت العينة
لازم يكون فيه يعني معلم إنه هي مكانها مختلف وفيه
شوية تجعيد لكن باقية الفيلم لازم يبقى smoothشغلة
مهمة برضه as soon as a drop of blood is placed on
the glass slide مجرد ماحط ال drop على ال slide يا
بنات لازم أفرض ما أستنى عليها لأنه لو أنا تركتها
شوية إيش ممكن يصير؟ ممكن تبدأ أنتوا عارفين أن
خلايا الدم لو أنا جبت عين الدم و حطيتها بتيوب و
تركتها شوية هتبدأ تفصل ال RBCs تحت و ال white BCs
فوقها صح؟ تلك هيصير في ال drop بتاعة ال blood أنا
لو تركتها قبل ما أفرضهاهتبدأ الـ RPCs ترسف تحت
والـ YPCs تقعد فوق لأعلىفلما قادش أسحبها بالـ
Spreader الـ Spreader هتروح ساحبة من الخلايا اللي
الأعلى وتاخدها عند التالي فبالتالي هيكون التوزيع
في الفيلم مش طبيعي تلاقي الـ Blood Film توزيعه مش
جيد الخلايا الكبيرة اللي هي بتشمل الـ White Bases
هتلاقيها متجمعة عند الأطرا بتاعة الـ Field بتاعة
الفيلم أو في الوسط هتلاقي عدد أكبر من الـ RBCs
ويخلو تقريبا أو يقل عدد الـ White Basesإذن مجرد ما
.. مجرد ما أحط ال drop لازم أفرد قلقتني يجي ل
thickness of the spreader يعني إيش الحاجات اللي
بتتحكم في صمك ال spreader؟ في حاجات من عينة الدم
نفسها اللي هو ال hematocrite إذا كان بنات ال
hematocrite كتير عالي يعني العين ال .. ال .. ال
hemoglobin فيها عالي وقلايا الدم الحمرة فيها كتيرة
هذه متوقع أنها تبقى thick لما أجي أفردها ممكن يطلع
معايا الفيلم thick إيش بروح بعمل بقلل الزاوية اللي
بين ال spreader و ال slide تمام بقلل الزاوية اللي
أنا فردت فيها لكن لو كان ال hematocrit قليل ال
angle هذه لازم أنا أزودها تمام عشان يطلع الفيلم
هذه الصورة عندي بتوضح لو كان ال hematocrit عالي
بقلل الزاوية هذه اللي هي بتصنعها الـ Spreader مع
الـ slide نفسها عشان أحصل على فيلم thin لكن لو كان
الـ hematocrit قليل أنا بحاول أسمك الفيلم شوية
فبزود الزاوية وبالتالي بزيد ال thickness بتاع
الفيلم هلقيتش اللي بتحكم في ال thickness بتاع
الفيلم؟ أول إشي الزاوية حكينا عنها بعدين حجم ال
drop كل ما كانت ال drop أكبر كل ما كان ال
thickness أكتر شغلة تالتة اللي هو سرعة الفردلما
بكون بفرض شوية شوية هيبقى الفيلم thick لكن لما
بفرض بسرعة هيبقى الفيلم thin طيب إيش هي الأسباب
اللي ممكن تخلي ال blood smear سيئة أول حاجة حجم ال
drop من ال blood إذا كانت كبيرة كتير أو صغيرة كتير
طبعا مش هيطلع معايا الفيلم كويس spreader slide
pushed across the slide in a jerky manner هلقيت
لما باجي بسحب ال spreader هيك في هذا الاتجاه
المفروض أسحب حركة واحدة بدون ما إيدي ترتعش أو
تتوقف لو ارتعشت أو توقفت هتلاقي أنه طلع عندك خطوط
في الـ blood film وطلعت الفيلم اللي عملتيه طلع سيء
طيب الشغل التالتة ألاقيت أحيانا إحنا المفروض بنيجي
بنسحب ال spreader على طول ال slide هذه أحيانا ما
تقدريش تظلك موصلة للآخر أو إيدك بتحرف على جهةهذه
برضه بتطلع معاك blood smear إما ما ال hotel أو إنه
مش straight مش عدل الشغل التاني ال angle يعني انت
ماقدرتيش تعمل ال angle المناسبة اللي هي 30 درجة
بال spreader أو معملتها هذه تقريبا اللي قلناها
failure to push the spreader slide completely
across the slide ان انت ماقدرتي توصلي لآخر ال
slide بال spreader يعني ممكن تكوني قطعتي من نص
الطريقالـ Regular Spread with Ridges and Long Tail
لو طلع معاكي Spread غير منتظم وفيه تضاريس والـ
Tail له طويل ممكن يكون بسبب الـ Spreader نفسها يا
بنات الحفة اللي بفرض فيها تبقى نفسها فيها مشكلة
ممكن تبقى مش نظيفة أو مكسرة ما هي أزاز فممكن يكون
فيه يعني شقوق صغيرة أو تكسيرات صغيرة أو تعروجات
صغيرة في طرفهايأثر على شكل الاسمير طيب number
seven holes in film أحيانا بعد ما بفرض بطلع بلاقي
طلع عندي ثقوب في الفيلم ممكن هذا يكون نتيجة ال
contamination لل slide بال fat أو ال grease هلقيت
ال slides عشان يخزنوها في العلب اللي بتجينا فيها
أحيانا بحطوا بينها مادة زيتية خفيفة عشان يتقلل
الملءفيفضل إنه قبل ما أشتغل على الـ slides أغسلها
بـ Ethanol مركز عشان أنظفها من أي fat أو أي دهون
أو أي مادة شمعية بتكون فيها لأن هذه المادة الشمعية
لو دلت على الـ slide هتعمل طبعا محل الشمع مش هيجي
blood أو محل الزيت مش هيجي blood فهيترك كأنه ثقوب
في الاسمير cellular degenerative changes إذا لاقيت
الخلايا يعني كأنها متكسرة لما أجي أحط تحت
الميكروسكوبممكن يكون بسبب إن أنا ماعملت Fixation
في الوقت المناسب للشريحة تبعتي أو إن أديقت Fixing
Time أو Methanol Contaminated with Water يعني هنا
مشكلة في الـ Fixation إما إن أخرت الـ Fixation أو
وقت الـ Fixation ماكانش كافي أو إن الـ Methanol
اللي أنا استخدمته للـ Fixation كان صيرله
Contamination بالميّه هنا أمثلة لـ Blood Film سيئة
نطلعفينا واحد جيد هيو اللي هو رقم D ماخد تقريبا ال
bullet shape فيلم من البداية بيكون thick بعد هيك
بيصير thin هذا الفيلم كويس نيجي لأ مثلا ايه
ملاحظين كيف التال مشرشر هذه بتكون عادة نتيجة أن ال
spreader نفسها فيها مشكلة ال slide اللي استخدمتها
للفرد هي اللي فيها المشكلة أو طرفها انكسر أو مش
انضيف بيه ال blood film هنا كتير thickهذا الـ
blood flow ممكن يكون نتيجة الـ drop إنها كبيرة أو
إن سرعة الفرد أنه كانت بطيقة أو إن الزاوية كانت
كبيرة رقم C شايفين تقريبا يعني مافيش tail واضح
للعينة thickness مختلف فيها تداريس الفيلم مغطي كل
الشريحة بالإضافة لوجود holes شايفين ثقوب في
الشريحة هذا بيدل على إن الشريحة نفسها مش أنظفة
النهاية برضه ل blood film عندى هنا هذا نفس الاشي
أطرافه مشرشرة هذا مقطع هذا يعني قصير وهذا قصير هذا
كويس هذا فيه ثقوب هذا طرف شايفين ارتقال مش منتظم
هنا فيه منطقة فاضية في الوساط يعني هذه أشكال ممكن
احنا نشوفها عند الفرد تقريبا هذا أفضل واحدوإن كان
.. بباين إن اللي كان يفرد كان يعني بيمشي ببطء إلى
حد ما لكن هو أفضل واحد طيب
أحيانا يا بنات أنا باخد كل الإحتياطات و بشتغل كويس
لكن بيكون في حاجة في ال blood نفسه أثرت على الفرد
يعني هذه الحاجة موجودة في عينة الدم نفسها يعني ما
.. ما بقدر أتحكم فيهاهذه بيسميها biological causes
of poor smear أشياء في عينة الـ blood بتأثر على
جودة الفرد أول حاجة الـ cold agglutinin إيش يعني
ال cold agglutinin؟ ألاقيت في بعض الأحيان إحنا
قلنا إنه أو بتعرفوا إن خلايا الدم يا بنات عادة
بيكون عليها أنتجينات عارفين الـ Ant A عارفين الـ
Antigen A و الـ Antigen B و فصائل الدمفي أنتجينات
تانية بتكون على سطح خلايا الدم الحامرة فلاقيت
الأنتجينات هذه من البديهي عشان الإنسان يكون طبيعي
ومايصيرش عنده مضاعفات مايكونش إلها أجسام مضادة في
الدم عنده نفسه يعني الـ Antigen و الـ Antibody مش
لازم يجتمع في نفس الشخص صح؟ وإلا بيصير
Agglutination في نفس الشخص وممكن يصير عنده مضاعفات
خطيرة في بعض الأحيان قد يجتمعوا قد يجتمعوا بسبب
حالات مرضيةإذا كان الشخص اجتمع في Antigen
وAntibody ممكن يصير عنده Agglutination طيب الـ
Agglutination هل هيصير في جسمه يؤذي؟ هذا برجع لنوع
الـ Antibody إيه Antibodies إذا وجدت بتشغل على
درجة حرارة الجسم بيسموها Warm Antibodies هذه بتشكل
خطورة على الإنسان ليش؟ لأنه بتعمل تفاعل في داخل
الجسم لأن هي أصلا Warm وبتشغل على 37% لكن في
Antibodies تانيةبسموها cold ممكن تجتمع الـ antigen
و الـ antibody فى داخل الجسم لكن ما بيشتغل نهائيا
على 37 تمام يعني ما بيشكل خطورة فى داخل الجسم
بينما لو أنا سحبت العينة اخترقتها شوية فى ال room
temperature هتبدأ تعمل agglutination عشان هيكسم
منها cold agglutination تشتغل على درجة حرارة
منخفضةطيب أنا سحبت عين الدم وجيت فرتها وطلعت عليها
تحت المايكروسكوب لقيت الخلايا عاملة agglutination
بقول أه احتمال يبقى فينا cold agglutination طبعا
هذه بتكون واضحة هنتعلم شكلها بتكون واضحة جدا تحت
المايكروسكوب طيب كيف ممكن أحل مشكلة ال cold
agglutination ولا إشي بدفع العين شوية بدفع العين
شوية ممكن يفك ال agglutination وأروح أفردها دُغري
طب لو ما أفكرممكن أسحب عينة جديدة في أدوات كلها
pre-warmed يعني أدفّي السرنجة، أدفّي الـ needle،
أدفّي الـ tube، أدفّي الـ slide، و أفرد دُغري وما
أتيح لها فرصة إنها تعمل agglutination ما أتيح لها
فرصة إنها تبرد الـ antibodies عشان تشتغل ماعطيهاش
فرصة إنها تعمل agglutination فححصل على blood film
جيد إذا السبب الأول وجود cold agglutination تمام؟
سمينا cold لأنه بشتغل على درجة حرارة الغرفة ما
بشتغل على حرارة الجسمطيب السبب التاني ليبيميا
ارتفاع الدهون في الدم طبعا هذه الدهون هتعمل عند
ثقوب في ال blood film زي اللي حكينا عنها قبل بشوية
هذه ما .. يعني مافي حاجة ممكن اعالجها من خلالها
خلاص يعني هيظل ال blood film بمشكلته ثغرة ثالثة
اللي هو roll of formation يمكن مر عليكم إيش يعني
roll of formation إن خلايا الدم تتصفط فوق بعض زي
.. زي العملة المعدنية زي ال coins تمامطبعاً هذا
برضه بيكون نتيجة مشكلة عند الشخص نفسه أدت لتجمع
الخلايا بهذا الشكل هذه الصحيح ما إلها حل يعالجها
ولا يحلها يعني هي هتظل عاملة role of formation و
هتبين في الـ blood film إنه فيها role of formation
طيب
هنا بقولك إحنا حكينا عن الـ wet jasmine اللي
استخدمنا فيها two slidesلكن بقولك على الرغم من
إنها had the easiest and most popular method طريقة
الأسهل والأكثر شيوعا لكن ما بتعطينيش equality
smear لكن بالرغم من هيك إحنا بنستعملها طب ليش ما
بتعطينيش equality smear؟ إيش مساويها؟ لاحظنا فيها
أو بنلاحظ إن ال white pieces إلى حد ما مش موزعة
بشكل جيد في ال blood film كافي يعني يعني أنا ال
white pieces عندي إلها أحجاميعني مثلا الـ Monocyte
أكبر واحدة هتلاقي أن الـ Monocyte راحت معاكي على
الطرف من سحبت مع الـ Spreader للآخر بينما الخلايا
الأصغر اللي زي الـ Lymphocyte هتلاقيها في نص الـ
Blood Film طبعا فبالتالي بقولك أنه في يعني مش
تعطينيش high quality smear لكن بالرغم من هيك احنا
بنستخدمها طبعا كمان ممكن تعطيني بعض الـبعض
التغيرات في أشكال الخلايا عند أطراف الفلم خاصة
طبعا الاربسيز blood smear produced the most
uniform distribution of blood film أفضل واحدة
حكينا اللي هي blood smear اللي هي باستخدام الجهاز
طيب
نيجي لل slide fixation and staining هلقيت يا بنات
احنا حضرنا blood smear ل blood smearوهي هيك أنا مش
هقدر أشطر عليها حاجة لازم أعمللها تثبيت على
الشريحة و أعمللها Staining المرحلة الأولى أنا بعرف
أنكوا أخدتوها في المقدمة بس المرحلة دي أنا مش فاقة
ماعرفش يعني إذا أخدتوها ولا لأ لكن رغم ذلك أنا
هحكي يعني مافيش هندي مشكلة نيجي لل slide fixation
الصحيح ال slide fixation أنه أنا بدي أثبت الخلايا
على الشريحة عشان بعد هيك أصبغها لأن لو ما أثبتها و
حطيت الصبغة هتنغسل الخلايا وتروحطيب قبل ما أعمل
تثبيت بمادة مثبتة احنا بنستخدم مادة بنثبت فيها قبل
ما نعمل تثبيت في عندي خطوة مهمة جدا قبل التثبيت
وأنا بعتبرها رقم واحد في الـ Fixation اللي هي أني
أترك الشريحة يصير لها Good Drying لأن لو الشريحة
منشفتش بشكل جيد هتلاحظ أنه أيش ما تحط عليها
Fixative هينغسل وينزلو مش هيصير لها فكساشن خالص
فبالتالي أهم حاجة ان اعمل drying للشريحة بتركها
على بنش أفقي تنشف براحتها بعيد عن أي درجات حرارة
مرتفعة لما تنشف مظبوط باخد الشريحة هذه أو السمير
وبعمل لها فكساشن هنا بقولك ان لو بدي أصبغ
بالليشمانستان هي الخطوات اللي عندي نيجي لخطوة ال
fixationزي ما قلتلكم عشان أحافظ على الـ Morphology
للخلايا لازم أعمل لها Fixation بـ Methanol احنا
يعني عادة المستخدم الميثانول هو الأفضل يعني في الـ
Fixation الميثانول لكن لأنه يعني كارسينوجينيك
بنستبدله أحيانا كتير بالـ Ethanol طبعا عملية الـ
Fixation الهدف منها أني أحافظ على الـ Morphology
للخلايا يعني فرضا أنا يعني فرضت الفيلمومافيش معايا
وقت أصبح اليوم مثلا بدي أمشي أو أخلص شغل بنفعش
أسيبه لبكرة بدون fixation بنفع أسيبه بدون صباغة بس
بنفعش أسيبه بدون fixation فهو عملية ال fixation
كلها من دقيقتين إلى تلت دقائق بعمله fixation
وبتركه طالما أنا عملت fixation أضمنت أن الخلايا مش
هتخرب ولا شكلها هيتغير إذا ضروري أعمل fixation as
soon as possible after they have dried بعد ما
الأفلام عنده أو بعد ما الشرايح عندي تنشف لازم
أعمللها fixationبسرعة كيف بتتم عملية الـ Fixation
في هذا الـ Staining Jar أكيد شفته في الانسجار بحط
فيه الـ Ethanol أو الميثانول المركز و بحط فيه
الشريحة من دقيقتين إلى تلت دقائق و بغطيه طبعا
ضروري جدا أغطيه باستمرار لأنه لو انتصرت رطوبة من
الجو أو ميه طبعا بخار الماء لرطوبة هيأثر على
تركيزه بالتالي هيبطل Absolute Alcohol وهذا هيأثر
على أشكال الخلايا هيخرب عند cell membrane تاع
الخلاياوحتى بقولك يعني أنت إذا بتستخدمه المفروض
تغيريه من مرتين إلى تلت مرات يوميا لأنه بتخافي
تدخل هنا في عندنا ملاحظة مهمة الملاحظة هذه بتقولك
إذا كان يعني ضروري خلال عملية الـ fixation أنه
مايكونش فيه ميّه نهائيا يعني لا قبل ال fixation
يصير contact الفلم بميّه لأن لو صار contact بميّه
هيخرّب ال blood film هيعمل abnormal morphology في
الخلايالو كان فيه رطوبة أو ميّه خلال الـ Fixation
هنا هتظهر على شكل قطرات الميّه هذه هتظهر على شكل
بُقع لامعة على الخلايا و هتغلبني في الـ diagnosis
يعني أول إشي هتخرب أشكال الخلايا و ممكن تتدخل في
الـ diagnosis يعني ما أعرف أقرأ الـ blood film
بشكل جيد منهاهنا بقولك عشان تحافظي على الكحول لو
انت عندك إعزاز كحول لازم تبقى مغطى كويس ماتتركش
منها أيه المفتوحة للهواء الجوي لأن الكحول دُغري
هيمطس المي أو البخار الماء ويرتبط فيه وبالتالي
هيقلق
مشهورة باسم عاملها Romanowski Group of Staining
يعني هي مجموعة كبيرة بتشمل أكتر من صبغة من أنواعها
Magerland, Gemstein, Leishmanstein, Fieldstein,
Reitstein برضه فيه Reit Gemstein فيه يعني أنواع
كتير منها كلها هذه مسميات لصبغات بستخدمها لصباغة
blood filmهلقيت الصبغات هذه اللي بستخدمها لصباغة
الـ Blood Film كلها بتشترك في نفس الـ Principle
لكن بيختلف المسميات أو الشركات المزودة بالصبغة إيش
هي الـ Principle بتاعة الصبغة؟ خلّينا حبة حبة نفهم
إيش الفكرة بتاعة الصبغة عشان نعرف إن هي الـ
Principle العامل الـ Roman Sky Standing طبعا
الصبغة مكونة من شقين شق حامضيانيونيك وشق قاعدي
كتايونيك الشق القاعدي قد يكون مثلين بلو أو أحد
مشتقاته زي الأزربي مثلا الشق الحامضي ممكن يكون
أيوزين أيوزين Y أيوزين B طبعا بيختلف إيش المشتق
لكن إحنا بنشترك إنه في شق حامضي وشق قاعدي إيش
التركيبة أو إيش ال derivative هي الاختلاف بين صبغة
وتانية لكنالفكرة الأساسية في كل الصبغات واحدة طيب
نيجي نفهم إيش الـ Principle بتاعة الصبغة إحنا
قولنا إنه في عندنا شق قاعدي اللي هو الـ Cationic
زي مثلين Blue أو مشتقاته هذا راح يرتبط بالأجزاء
الحامضية بالخلية يرتبط بإيش؟ بالأجزاء الحامضية إيش
في عندي حاجة مهمة حامضية في الخلية؟ النواء النواء
مكونة من حمض نووي أحمض نووية DNA وRNA صح؟فبالتالي
النواء عادةً هتنصبغ بالجزء اللي هو الـ Basic بالـ
Cationic Dye الميسيليني بلو وهتظهر باللون الـ
purple هي اللون تاع النواء تقريبًا معظم الأنوية
تشترك بنفس اللون مع درجات بسيطة من الاختلاف طيب،
في حاجات حمضية تانية في الخلية هتاخد اللون هذا؟
صح، فعندنا مثلًا خلية اسمها Basophil خلية الـ
Basophil فيها حبيبات حمضية هتاخد برضه صبغة
الميسيليني بلو
النوع بالاضافة لأي شاق حامضي في الخلايا هياخد صبغة
الميسترينيبلو أو الـ cationic type أو الـ basic
type طيب ال basic type ايش بسميها؟Xenophilic محبة
للحامض عشان هي ارتبطت بالأجزاء الحامضية من الخلية
تمام؟ إذا الـ Basic ده إيش بسميها؟ هي Basic لكن في
طبيعتها Xenophilic تحب الحامض وترتبط بالأجزاء
الحامضية من الخلية زي Ash زي الـ Noir وزي الحبيبات
الـBasophil طبعا هنا هتظهر باللون الـ purple درجات
من الأزرق مع اللون الـPersianهيبنى يجى للشق
الحامضى الشق الحامضى إيش هيصبغ طبعا هو بيزو فلك
هيصبغ أي أجزاء قاعدية في الخلية زى إيش أجزاء
قاعدية في عندي خلية اسمها أزينوفيل فيها حبيبات
حبيباتها هذه قاعدية هتبدو حبيباتها ماخدة الصبغة
اللى على لون اللى هي الصبغة الـacidic تبدو باللون
الأحمرأحمر كرميدي فبالتالي الأزاق الحمضية هتاخد
الصبغة القاعدية وتظهر باللون المنافسش الأزاق
القاعدية هتاخد الصبغة الحمضية وتظهر باللون الأحمر
ودرجات الأحمر الكرميدي break-red تمام؟ طيب نيجي
احنا هلقيت قلنا على الـBesophilحبيباتها ash قاعدية
وبتاخد صبغة قاعدية لـ Xenophil حبيباتها ash قاعدية
وبتاخد صبغة خامدية قبل نيوتروفيل من اسمها متعادلة
هي هتاخد من التنتين فهتظهر في لون متوسط بين اللون
البربول الغامق واللون الأحمر اللي هو اللون البنك
اللون الزهري طيب مهم جدا أن الـ BH بتاعة الصبغة
نضبطها باستخدام phosphate buffer لو اتغيرت الـ pH
هتظهر الخلايا بألوان مختلفة كيف يعني؟ يعني لو كانت
مثلا درجة الحموضة تاعت الصبغة عالية هتتغير الألوان
لو كانت درجة القاعدية عالية هتتغير الألوان الآن
لازم أضبط الـ pH تكون متعادلة باستخدام phosphate
buffer عشان أشوف الصورة هذه لو صار اختلاف في الـ
pH عدي هورجيكم كيف بيصير الفيلم واضحة هذه ان شاء
الله بتكونهذه الـ principle لكل أنواع الـ
hematologist stain هي كلها نفس الـ principle لكن
بتختلف المسميات الـ hematologist stain يا بنات
بسميها polychromatic stain إيش يعني polychromatic
يعني بتعطيني ألوان متعددة في الخلايا يعني ما
أعططنى لون واحد لكل الخلية زي مثلا مثليني blue لما
كنتوا تصبعوا في ال gram stain هم يعطيكوا لون واحد
لكن هذا لأ الصبغة هي عبارة عن خلية تنصبغت هنا عشان
تعطيك ألوان متعددة في نفس الخلية هنا بسميها
polychromatic stain متعددة الألوان هاي هنا بقولك
neutrophilic granules كيف اللون اللي أختته،
xenophilic granules، mesophilic granules الـ
mesophilic تقريبا لونها غامق من لون النواة هنا
شوية على أحمر، هنا بيكون لونها pink
هنا خطوات الصبغة هذه خطوات الصبغة انا بقولكم
الخطوات العامة للصبغة هي كتير بسيطة انا اول اشي
عملت لسمير عملتلها drying بعدين عملتلها fixation
صح هى هدول الخطوات احنا خلصنا منهم بعد ما اعمل
fixation الصبغة عادة بستخدمها diluted يعني بخفف
الصبغةوبعد ما بخفف الصبغة بجيب الشريحة بغمرها
بالصبغة طبعا وقت معين إيش الوقت هذا يعني بعتمد على
التجربة أنا بجرب الوقت المناسب لما بحضر صبغة جديدة
بجرب إيش الوقت المناسب لها وبعتمده ممكن يتراوح من
10 إلى 15 دقيقة وبعد هيك ببترك الشريحة تنشف وبتفرج
عليها تحت ال microscope هذه ال principle بتاعة
الصباغة بشكل عامعفواً الـ procedure بتاعة الصباغة
بنجفف بنعمل fixation بنصبغ بصبغة مخففة بس مش أكتر
يعني بنسيب الشريحة تنشف في الهواء بعد هيك بحطها
تحت الميكروسكوب وببتفرج عليها طيب هنا بقولك stain
in characteristics characteristics of correctly
blood-stained normal film يعني لو أنا فردت فيلم
وصبغته وكانت الصبغة كويسة إيش الألوان اللي أنا
لازم أشوفها طبعا إحنا نوّهنا توي للألوانسنعود
ونعيد الأنوية هيكون لونها purple لأنها تاخد صبغة
الميسيلين بلو الـ cytoplasm تختلف حسب مكونات الـ
cytoplasm يعني مثلا الارثروسايت هيظهر لون pink لون
deep pink اللي هي الاربسيز الهيموجلوبين هياخد
الصبغة الحامضية النيوتروفيل هتظهر تقريبا pink
الانفوسايت الانفوسايت طبعا هي خلية هنتعرف عليها
هيبقى الـ Cytoplasm تبعها Blue تقريبا ديب بلو الـ
Monocyte الـ Cytoplasm بتاعها هيكون Gray Blue الـ
Basophil هيبقى الـ Cytoplasm Blue to purple ابنجي
للـ Granules لـ Granules الـ Neutrophil طبعا
الكلام هذا شوية هيكون جامد لكن لما تشوفوه على
الصور و تتعودوا على أشكال الخلايا هيكون بسيط ان
شاء الله الـ Neutrophil الشكل حبيباتها Fine and
Purple أو حتى مش Purple بتقدر تقول Pinkأزينوفيل
Red Orange البازوفيل حبيباتها purple black
المونوسايت غالبا مافيش فيها granules يعني أو very
fine reddish granules البلاتلت بيكون لونها purple
يعني أنا بقدر أقولك الآن هذه الشريحة إحنا هنفهمها
أكتر لقدام لما نشوف الصور تحت الخلايا إن شاء الله
هنا هذه الشريحة برضه بورجيكي أشكال وألوان الحبيبات
تحت ال bazofil ويه الازينوفيل
طيب نيجي لبعض المشاكل اللي ممكن يعني أو الأشياء
اللي بتعمل عندي مشاكل باستفاغة أحنا قولنا إن الـ
Phosphate Buffer لازم نستخدمه عشان يضبط الـ pH
تاعت الصبغة هنا بقولك لو كانت الصبغة Two Acidic،
إيش ممكن يصير؟ يعني كمية الحامض فيها زيادة
فبالتالي الأشياء اللي هتاخد الصبغة الحامضية هيبدو
لونها Pinker يعني لو جينا هذا فيلم عادي، هذه
الصغيرة اللي شايفينها هان هذه RPCsقارنه بين لون
الـ RBCs الطبيعي ولون الـ RBCs اللي في الصبغة
الحمضية بزيادة طبعاً هتاخد الصبغة الحمضية أكتر
ويبدو لونها أكثر حمرارة لكن الأجزاء اللي بدها تاخد
الصبغة القاعدية نظراً لأن الصبغة القاعدية أو الشق
القاعدي نسبته قليلة أو ضعيف هتكون فاتحة زي أش زي
النواء يعني شوفوا النواء الطبيعية كيف غامقة بينما
النواء اللي بتبقى صبغتها too mesophilic بتبقى كتير
فاتحةعن العكس لو كانت الصبغة too basic هتلاقي
الفيلم بدأ لونه كله أزرق غامق أزرق غامق يعني هاي
مثلا هذا ال blood فيلم العادى اللى تاوه شوفناه هذا
كله جاي ماخد الصبغة الميثيلين blue أعلى هتلاقي
اللون الأزرق فيه مكتسح الأنوية غامقة جدا لكن
الأجزاء اللى بدها طبعا الصبغة هنا قاعدية زيادة
يعني نسبة الحامضية فيها قليلةفبالتالي الأجزاء اللي
بدأت تاخد الصبغة الحمضية هتكون فاتحة يعني مش ماخدة
صبغة حمضية واضح جدا اللي هو ال RBCs ال RBCs
المفروض يكون لونها pink أكتر من هيك على أحمر أكتر
من هيك لكن لأنه مافيش صبغة حمضية كفايةوظهرت باللون
الأزرق تمام؟ إذن if the stem buffer mixture is too
alkaline الـ red blood cells ستظهر grayish blue
شايفين لونها بدل ما يظهر pink؟ ظهرت grayish blue
and the white cell nuclei will stand very deeply
purple هتلاقي الأنوية صارت غامقة جدا فالبيئة اللي
بتاعة الصبغة لازم تكون متعادلة ومضبوطة بالفسفات
بفرطيب هنا بقولك أحيانا إيش الأسباب اللي بتقدي لـ
Two Acidic Stain وكيف أعالجها أو Two Bezig Stain
وكيف أعالجها Two Acidic Stain إذا ظهرت عندي
الألوان اللي شفتها إنه الفيلم كله جاي أحمر هيك ال
RBCs فاتحة كتير و الأنوية مش مصبوغة كويس ممكن يكون
وقت الصباغة مش كافي أو أنا غسلت كتير يعني بعد ما
صبغت أنا بعد ما بصبغ بعمل Washing عملية ال Washing
هاد استغرقت وقت طويلأو الصبغة كانت قديمة طبعاً بدي
أعالج المشاكل هدول بطول الوقت بتاع الصبغة بضبط الـ
pH بتاعت الباستان و بقلل ال buffering أو الوضع لو
كانت too alkaline ممكن يبقى ال blood film thick أو
prolonged staining أو insufficient washing عملية
ال washing ماكنتش كافية أو ال pH components نفسها
الصبغة نفسها الـ pH بتاعتها مرتفعةبنشيك على الـ
pH، بنقلل الـ Staining Time، بنطول الـ Washing
Time لحيث بنكون خلصنا جزئية الـ Staining في عندنا
فيديوهات هنشوفها ملحقة بهذا الـ PowerPoint الصغير
أو بهذا الفيديو الصغير في عندنا فيديو عن الـ Blood
Smear كيف بنحضره عشان الراجل مع بعض، يعطيكوا
العافية