Pada tahun 1520 - an selama Reformasi Protestan, kota itu, di bawah bimbingan politik Jacob Sturm von Sturmeck dan bimbingan rohani Martin Bucer memeluk ajaran agama Martin Luther. Para penganut mereka mendirikan Gymnasium, yang dipimpin oleh Johannes Sturm, menjadi Universitas pada abad berikutnya. Kota itu pertama kali mengikuti Pengakuan Tetrapolitan, lalu Pengakuan Augsburg. Ikonosisme Protestan menyebabkan banyak kerusakan di gereja - gereja dan di daerah - daerah lain, meskipun Luther sendiri menentang praktek semacam itu. Strasbourg adalah pusat beasiswa humanis dan pencetakan buku awal di Kekaisaran Romawi Suci, dan pengaruh intelektual dan politiknya berkontribusi banyak pada pendirian Protestantisme sebagai denominasi yang diterima di barat daya Jerman. (John Calvin bertahun - tahun menjadi pengungsi politik di kota itu). Dewan Penasihat Strasbourg Sturm dan guldmaster Matthias mewakili kota di Imperial Diet of Speyer (1529), tempat protes mereka mengarah ke perpecahan Gereja Katolik dan evolusi Protestantisme. Bersama empat kota bebas lainnya, Strasbourg menyajikan pengakuan dosa tetrapolitana sebagai buku iman Protestannya di Imperial Diet of Augsburg pada tahun 1530, tempat Pengakuan Augsburg yang sedikit berbeda juga diserahkan kepada Charles V, Kaisar Romawi Suci.
Yang menghabiskan beberapa tahun sebagai pengungsi politik di kota?
John Calvin