La langue officielle est l'ouzbek, qui appartient au groupe turco-altaïque. La plupart des inscriptions officielles sont dans cette langue, récemment transcrite en alphabet latin (mais qui subsiste en cyrillique sur les affichages de certaines localités reculées). Dans les villes de Samarcande et Boukhara (mais pas autour sauf quelques villages isolés), la population est persanophone (tadjik) ; dans le nord du pays (Karakalpakie) on parle un autre dialecte turki (le karakalpak) très similaire au kazakh. On trouve également quelques minorités parlant le kirghize dans le nord-est du pays. L'ouzbek est la langue de la population de tout le reste du pays. Du coup, le russe, qui s'est imposé durant la longue domination russe puis soviétique, joue encore le rôle de langue véhiculaire mais il devient moins connu des jeunes, surtout hors des grandes villes. À Tashkent, il y a des gens qui continuent à ne parler que russe, et dans les villes et villages tadjiks, l'ouzbek est toujours compris mais peu apprécié. L'afflux de touristes et la mondialisation ont évidemment aussi donné de l'importance à l'anglais mais la population à maîtriser cette langue reste très minoritaire et concentrée dans les grandes villes. La population de Boukhara a la réputation d'être plus polyglotte que la moyenne, notamment en anglais mais aussi, de façon plus marginale, en français ou en allemand. La présence de centres culturels français à Tashkent et à Boukhara explique la présence d'une minorité francophile (héritée aussi de la francophilie de l'époque soviétique). Enfin, la présence passée de l'armée allemande dans la région de Termez, près de la frontière afghane, a permis à quelques Ouzbeks de maîtriser leur langue.