Materi penelitian yang digunakan adalah daun sirih hijau tua (Piper betle L.), susu sapi mastitis subklinis, antibiotik penisilin-dihydrostreptomycin, NaCl fisiologis, pewarna safranin dan kristal violet, iodine, decolorize, minyak imersi, 1 liter aquades steril dan Potato Carot Agar (PCA).