López uskoi voivansa antaa liittoutuneille kohtalokkaan iskun ja aloitti 25 000 miehen suurhyökkäyksen 35 000 liittoutuneiden sotilasta vastaan Tuyutyn taistelussa.
24. toukokuuta 1866, yksi verisimmistä taisteluista Latinalaisen Amerikan historiassa. Vaikka López oli hyvin lähellä voittoa Tuyutilla, liittoutuneiden armeijan raivoisa vastarinta ja Brasilian tykistön päättäväinen toiminta murskasivat hänen suunnitelmansa. Molemmat osapuolet kärsivät suuria tappioita: Paraguayn yli 12 000 tappiota liittoutuneiden 6 000 tappiota vastaan.