Ondoren, zeramidoaren sintesia de novo, palmitatoaren eta serinaren kondentsazioarekin hasten da, 3-keto-dihidrosfingosina eratzeko. Erreakzio hau serin palmitoil transferasa entzimak katalizatzen du eta bidearen erritmoa mugatzen duen urratsa da. Ondoren, 3-keto-dihidrosfingosina dihidrosfingosinara murrizten da, eta ondoren dihidroceramidoa ekoizteko enzima (dihidro) ceramide sintasa acilazioari jarraitzen dio. Zeramidoa ekoizteko azken erreakzioa dihidroceramide desaturasaz katalizatzen da. Zeramidoaren sintesia de novo erretikulu endoplasmikoan gertatzen da. Geroago, zeramidoa zelularretara garraiatzen da, zeramidoa edo zeramingolipidoa transferituz.
(dihidro) zeramido sintasa