Il figlio maggiore di François de La Trémoïlle, Luigi III (1521-1577), fu il primo della sua famiglia ad ottenere lo status di duca quando Carlo IX gli conferì quell'onore nel 1563. Suo figlio con Jeanne de Montmorency, Claude (1566-1604), fece elevare il ducato in una parizia nel 1595, anche se non fu registrato come ereditaria nel "Parlamento" fino al 1599. Si era convertito al protestantesimo e aveva combattuto per gli ugonotti durante le guerre di religione francesi alle battaglie di Coutras nel 1587, Ivry
nel 1590 e Fontaine-Française nel 1595, e agli assedi di Parigi e Rouen. Nel 1598 sposò Carlota Brabante d'Orange-Nassau (1580-1631), figlia del leader protestante olandese Guglielmo il Silenzioso. La sorella di Claude, Charlotte Catherine de La Trémoille (d. 1619), sposò Henri I de Bourbon, principe de Condé (1552-1588) nel 1586, ma quando morì improvvisamente sei mesi prima della nascita del loro unico figlio nel settembre 1588, fu imprigionata con il sospetto di aver avvelenato suo marito per impedire il rifiuto del bambino come bastardo, anche se il re riconobbe il bambino come "premier prince du sang" e presunto erede della corona fino alla nascita di suo figlio, il futuro Luigi XIII, nel 1601.