De Gambrinus liga 2000/01 was het achtste seizoen van het Tsjechisch nationaal voetbalkampioenschap. Het ging van start op 28 juli 2000 en eindigde op 25 mei 2001.

Stand 

1 AC Sparta Praag was in dit seizoen de titelverdediger. 
2 1. FC Synot en FC Viktoria Pilsen waren in dit seizoen nieuwkomers, zij speelden in het voorgaande seizoen niet op het hoogste niveau van het Tsjechische voetbal. 
3 FK Viktoria Žižkov was de winnaar van de Tsjechische beker van dit seizoen.

Topscorers 
15 doelpunten
  Vítězslav Tuma (1. FK Drnovice)
14 doelpunten
  Pavel Hapal (SK Sigma Olomouc)
  Pavel Kuka (SK Slavia Praag)
12 doelpunten
  Radim Holub (AC Sparta Praag)
  Jiří Kowalík (1. FC Synot)
11 doelpunten
  Josef Obajdin (AC Sparta Praag)
10 doelpunten
  Leandro Lazzaro Luini (AC Sparta Praag)
  Michal Kolomazník (FK Teplice)
  Kennedy Chihuri (FK Viktoria Žižkov)
9 doelpunten
  Marek Kincl (AC Sparta Praag)
  Róbert Semeník (FK Teplice)
  Jiří Štajner (FC Slovan Liberec)
  Stanislav Vlček (SK Sigma Olomouc)

Tsjechie 1
2001